ПРИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПИЩЕВЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ 8 страницаХорошо смешивают и разливают асептично в (стерильные пробирки по 10 мл. Приготовление раствора сернистокислого висмута. Растворяют 1-20 г сернистокислого натрия (Nа2SO3) в 100 мл кипящей воды, 2-0,1 г аммоний-висмут лимоннокислого в 100 мл кипящей воды и 3-20 г маннита в 100 мя (кипящей воды. Смешивают растворы 1 и 2, кипятят, смесь в течение 1 минуты и добавляют раствор 3. Готовая смесь имеет белый цвет, мутная; перед использованием перемешать. Раствор можно хранить месяц в холодильнике. Кровяной - солевой агар (среда Wagatsuma). Состав:
Растворяют все ингредиенты в 1 литре дистиллированной воды и доводят рН до 7,5. Нагревают кипячением в течение нескольких минут до полного растворения всех ингредиентов. Не стерилизуют. Охлаждают до 50е и добавляют 10% отмытых чемовечееких эритроцитов. Все смешивают и разливают в чашки Петри. Среда Никодемуса Состав: Любой стерильный 2% питательный агар 1000 мл Этиловый спирт 80 мл Эмульсия двух желтков К расплавленному и охлажденному до 45-600С агару добавляют этиловый спирт и после перемешивания эмульсию яичных желтков. Тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри, которые можно хранить в холодильнике не более 3 суток. Эмульсию яичных желтков готовят путем эмульгирования отделенных от белка 2 желтков в 10 мл стерильного физиологического раствора. Среда Донована Состав: Любой стерильный питательный агар 11000 мл Трехзамещенный цитрат натрия 2,5 г Хлористый литий (LiCe.H2O) 2,5 г Стерилизуют при 1100С 30 минут, охлаждают до 45-500С и добавляют полимиксин «М» 200 000 ед. и эмульсию двух желтков. Тщательно (перемешивают и разливают в чашки Петри, которые можно хранить в холодильнике не более 7-10 дней. Солевой-полимиксиновый агар с 2, 3, 5-трифенил-тетразолий хлоридом (ТТХ) Состав: Любой стерильный 2% питательный агар 11000 мл Хлористый натрий (NaCl) 60 г Полимиксин «М» 200 000-400 000 ед. 2, 3, 5 - трифенилтетразолий хлорид 0,1—0,2 г Эмульсия двух желтков В агар после расплавления и охлаждения до 46-500С добавляют полимиксин, 2, 3, 5-ТТХ и эмульсию желтков, хорошо перемешивают и разливают в чашки Петри, которые можно хранить в холодильнике не более 7-10 дней.
Желточно-солевой агар (ЖСА) В качестве основы используют селективный солевой агар для стафилококков. По прописи, указанной на этикетке, готовят агар. К расплавленному и охлажденному до 45-500С агару добавляют 20 % желточной взвеси (асептически извлеченный из яйца желток взбалтывают с 200 мл изотонического раствора хлорида натрия). Смешивают агар с желточной взвесью, разливают по 20 мл в чашки Петри. Хранят в холодильнике в течение 2-х недель. Молочно-солевой агар. К расплавленному и охлажденному до 45-500С солевому агару добавляют 10 % стерильного обезжиренного молока, смешивают и разливают среду в чашки Петри. Хранят в холодильнике не более 2-3-х дней. Солевой бульон. 6,0 г хлористого натрия растворяют в 100 см3 мясо-пептонного бульона, устанавливают р Н так, чтобы после стерилизации он составлял при 250С 6,9 + 1. Бульон разливают в колбы или пробирки и стерилизуют при (121 + 1) 0С в течение 15 мин. Сахарный бульон. 1,0 г глюкозы растворяют в 100 см3 мясо-пептонного бульона, устанавливают р Н так, чтобы после стерилизации он составлял при 250С 6,9 + 1. Бульон разливают в колбы или пробирки и стерилизуют при (121 + 1) 0С в течение 15 мин. Среда с ДНК. 6,1 г трисаминометана растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды, доводят рН раствора до (9,0 + 0,1). К раствору добавляют 0,3 г ДНК, 10 г хлористого натрия, 1,1 см3 раствора хлористого кальция концентрации 1 г/дм3, 15 г агара, нагревают до полного расплавления агара. К охлажденной до 55-650С среде добавляют 9,2 см3 раствора толуидина синего (1,0 г толуидина синего «С» растворяют в 100 см3 дистиллированной воды) перемешивают и разливают по чашкам Петри. Хранить среду при температуре (6,0 + 2,0) 0С не более 7 суток Кристалл-виолет-азид-кровяной агар (среда Пейкера) Состав: а) основной агар: мясо-пептонный бульон 1000 мл. хлористый натрий (NaCl) 5 г. агар-агар 15 г б) 0,05% водный раствор кристалл-виолета в) 5,0% водный раствор азида натрия (NaN3) г) цитратная или дефибрвнврованная кровь кролика или человека. Части «а» и «б» стерилизуют при 120С в течение 20 минут, часть «в» стерилизуют текучим паром 30 минут. Для приготовления среды берут стерильно: основного агара расплавленного и охлажденного до 450С 100 мл. 0,05% водного раствора кристал-виолета 0,4 мл. 5,0% водного раствора азида натрия 1 мл. цитратиой или дефибрннироваиной крови 5 мл. Все тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Чашки со средой можно хранить в холодильнике не более 7 дней. Молочная среда с полимиксином (среда Калины) Состав: Расплавленный и охлажденный до 460С основной агар (как в среде Пейкера) 85 мл 01% водный раствор кристаллвиолета 125мл 10% водный раствор 2, 3, 5-ТТХ 0,5 мл Стерильное обезжиренное молоко 15 мл Полимиксин «М» 20000-40000 Все ингредиенты смешивают асептично и среду тонким слоем разливают в чашки Петри. Чашки со средой можно хранить в холодильнике 7-10 дней. Энтерококковая дифференциально-диагностическая среда (ЭДДС) Состав: Сухой питательный агар 35 г Автолизат дрожжевой 20 мл Глюкоза 10 г Дистиллированная вода 800 мл Расплавляют при нагревании, профильтровывают, стерилизуют при 1120С 15 мин, рН 7,2-7,4. Перед разливкой в чашки, в питательную среду добавляют ТТХ 0,1 г водного раствора кристаллического фиолетового 0,01 % 12,5 мл, налидиксовой кислоты 0,1 г, стерильного обезжиренного молока подогретого до 450С 200 мл, свежей дефибринированной крови (животного или человека) 50 мл. Содержимое размешивают и разливают по чашкам по 7 мл. Сахарно-дрожжевой питательный агар Состав: Сухой питательный агар 35 г Дрожжевой автолизат 20 мл Глюкоза 10 г Дистиллированная вода 1000 мл Расплавляют при нагревании, стерилизуют среду при 1120С 15 мин, рН 7,2-7,4. Сахарно-дрожжевой питательный агар с теллуритом калия. Состав: Сухой питательный агар 35 г Дрожжевой автолизат 20 мл Глюкоза 10 г Дистиллированная вода 1000 мл Приготовленную смесь расплавляют при нагревании, добавляют лимоннокислого натрия 5,0 г. Стерилизуют среду при 1120С 15 мин, рН 7,2-7,4. Перед разливкой среды в стерильные чашки добавляют 50 мл лошадиной сыворотки, 0,1 г налидиксовой кислоты и 0,7 г (35 мл 2 % водного раствора) теллурита калия, тщательно размешивают. Желчно-щелочной агар. Компоненты, рассчитанные на 1000 мл сахарно-дрожжевого питательного агара, растворяют в 600 мл дистиллированной воды, вносят 400 мл медицинской желчи. Перед разливкой в чашки добавляют 50 мл крови человека, или животного, 12,5 мл 0,01 % раствора кристаллического фиолетового и 20 мл 10% раствора КОН. Питательный бульон с глюкозой К100 мл питательного бульона, рН 7,2-7,4 прибавляют 0,2 г глюкозы. Среду стерилизуют однократно 15 мин при 0,5 атм. Среда с 2, 3, 5 — трифенилтетразолий хлоридом (ТТХ). Состав: мясопептонный бульон 100 мл дрожжевой экстракт 2 мл хлористый натрий (NaCe) 0,5 г агар-агар 1,5 г глюкоза 1 г 2, 3, 5-ТТХ 0,01 г Все ингредиенты, кроме ТТХ, автоклавируют при 1210С 10-12 мин. 2, 3, 5- ТТХ растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды стерилизуют текучим паром в течение 30 мин. Среда с молоком Состав: мясопептонный бульон 80 мл молоко (стерильное) 20 мл глюкоза 0,2 г агар-агар 1,5 г Стерилизуют при 1210С в течение 10-12 мин. Среда в чашках Петри нится в холодильнике не более 7-10 дни. Стерильное молоко добавляют в среду перед разливкой в чашки Петри. Среда Китт-Тароцци. Стерильные пробирки заполняют на 1-1,5 см кусочками печени, мяса или рыбы и заливают приготовленным мясо-пептонным бульоном с глюкозой и агаром. В 1 дм3 мясо-пептонного, рыбо-пептонного или печеночного бульона вносят 10 г глюкозы и 1,5 г агара, при нагревании постепенно расплавляют и стерилизуют при (121 + 1) 0С, рН проверяют до и после стерилизации (7,1 + 0,1). При приготовления среды впрок вместо добвления к ней агара на поверхность среды перед стерилизацией в пробирки наслаивают 0,5-1 см вазелинового масла. При применении среды Китт-Тароцци без добавления в нее агара или вазелинового масла на поверхность среды после посева наслаивают голодный агар или парафиновую смесь высотой 1-1,5 см. При посевах свежеприготовленную среду Китт-Тароцци (не более 3-х суток с момента приготовления) добавлять агар, вазелиновое масло или наслаивать на ее поверхность голодный агар не обязательно. Печеночно-глицериновая среда. К 1 дм3 печеночного бульона добавляют 5 г глицерина, 5 г глюкозы, разливают в пробирки или флаконы с кусочками печени (20-30 г печени на 100см3), устанавливают рН (7,0 + 0,1) и стерилизуют при (121 + 1)0С - 20 мин. Бульон триптиказо-пептонно-глюкозный с дрожжевым экстрактом и трипсином. 50 г триптического перевара казеина, 5,0 г пептона, 100 см3 дрожжевого экстракта, 4,0 г глюкозы, 1,0 г тиогликолята натрия добавляют к 900 см3 дистиллированной воды, устанавливают рН (7,0 + 0,1) и стерилизуют при (121 + 1)0С пробирки - 10 мин, флаконы – 15 мин. Хранят при комнатной температуре не более 7 суток. Применяют для культивирования C. Botulinum, образующих прототоксин, перед употреблением к 1000 см3 бульона добавляют 60 см3 1,5 %-ного раствора трипсина в фосфатно-буферном растворе. Среда Вильсон-Блер, измененная для анаэробов. Раствор железоаммонийных квасцов концентрации 50 г /дм3 и раствор сернисто-кислого натрия с массовой концентрацией 200 г/дм3 готовя на стерильной дистиллированной воде, extempore. Раствор сернисто-кислого натрия стерилизуют текучим паром в течение 1 часа. К 100 см3 расплавленного и охлажденного до 800С мясо-пептонного агара концентрации глюкозы 10 г/дм3 добавляют 10 см3 раствора сернисто-кислого натрия и 1 см3 раствора железоаммонийных квасцов. Устанавливают рН 7,5-7,8. Лакмусовое молоко. К стерильному молоку добавляют лакмусовую настойку до получения сиреневого окрашивания (на 100 см3 молока – 1 см3 лакмусовой настойки). Лакмусовое молоко разливают по стерильным пробиркам высоким столбиком, кипятят на водяной бане 15-20 мин и охлаждают для посева до 450С. Питательные среды для выделения и идентификации кампилобактерий. Транспортная среда Кери-Блэр. Растворить в 991мл дистиллированной воды при нагревании на водяной бане следующие ингридиенты: натрия тиогликолят – 1,5г, натрия фосфат двузамещенный – 1,1г, натрия хлорид -5г, агар-агар – 1,6г. При исследовании материала методом мембранных или ядерных фильтров количество агар-агара необходимо уменьшить до 0,4-0,5г. В охлажденную до 40-450С основу добавить 9мл свежеприготовленного 1% раствора кальция хлорида. Установить рН 8,4. Разлить по 10-12 мл в стерильные центрифужные пробирки, стерилизовать 1200С 30мин. Транспортная среда Амиеса. Состав:
Разлить по пробиркам и стерилизовать 1210С 15мин. Среда Preston для выделения кампилобактерий из молока. Состав: Питательный бульон с 5% лизированных эритроцитов лошади Полиммиксин В 5МЕ/мл Рифампицин 10мг/л Триметоприм 10мг/л Циклогексимид 0,1г/л Среда Парка для исследования продуктов птицеводства. Состав: Бульон для бруцелл с 7% лизированной лошадиной крови FBP – добавка Ванкомицин 20мг/л Триметоприм 10мг/л Полимиксин В 500МЕ/л Добавка для повышения аэротолерантности (FBP – добавка) Состав: Железа сульфат II 0,25г Натрия метабисульфит 0,25г Натрия пируват 0,25г Навески солей внести в сухую стерильную пробирку, добавить 5 мл стерильной дистиллированной воды. Указанное количество добавок рассчитано на 1л питательной среды. Растворение солей занимает 15-20мин при периодическом встряхивании пробирки. Правильно приготовленный раствор имеет оливковый цвет. Раствор не подлежит хранению и должен быть использован в день приготовления. Кровяной эритрит-агар. 40г эритрит-агара размешать в 1л дистиллированной воды, довести до кипения и кипятить до полного растворения 2-3мин. Среду разлить по 400мл, стерилизовать 1210С 20мин. В остуженную до 50-550С питательную основу внести FBP – добавку и 20 мл бараньей, лошадиной или донорской крови. Для придания селективных свойств возмлжно использовать одну из приведенных ниже селективных смесей. Кровяные добавки. Баранью или лошадиную кровь, асептически взятую у здоровых животных, дефибринировать с помощью стеклянных бус и хранить до использования при 40С в течение 7-10 дней. Смесь антибиотиков 1. Смесь антибиотиков 2. Ванкомицин 2,0 мг Цефоперазон 32,0 мг Полимиксин 0,05 мг Ванкомицин 10,0 мг Триметоприм 1,0мг на 200 мл среды Амфотерицин В 3,0 мг на 1000мл среды
Необходимые количества антибиотиков взвесить на весах и внести во флакон с 3,0 мл дистиллированной воды; смесь растворить при тщательном перемешивании. Угольный эритрит-агар. Состав: Эритрит-агар 36г Железо II сернокислое 0,15г Экстрат кормовых дрожжей (ЭКД) 4г Уголь бактериологический активированный 4г Вода дистиллированная 4г Стерилизовать автоклавированием 1210С 15мин. Агар Эндо, агар с эозин-метиленовым синим (ЭМС-агар), агар Плоскирева, висмут-сульфит агар, трехсахарный агар с солями железа, (TSI), среда Кесслера, энтерококкагар, азидный агар с эскулином и желчью, энтерококкагар, среда Клиглера, среда Олькеницкого, SS-агар (сальмонелла-шигелла агар), XLD агар (ксилозо-лизин-дезоксихолатный), ТСВS-агар (тиосульфат-цитрат-желчно-сахарозный агар), среда для контроля стерильности (тиогликолиевая среда), селенитовый бульон, питательная среда для накопления сальмонелл – магниевая среда, среда Левина, основа агара Байэрд-Паркера, транспортная среда Амиеса с активированным углем, основа тетратионатного бульона, эритритагар – сухие промышленные питательные среды, состав и способ приготовления указаны на этикетке. Допускается использование других коммерческих питательных сред, систем идентификации и диагностических препаратов, предназначенных для целей описываемых методов зарегистрированных в Республике Беларусь в установленном порядке. При их применении руководствоваться рекомендациями фирмы-производителя.
Приложение 1 Биохимические свойства бактерий рода Salmonella
- отрицательная реакция в течение всего срока наблюдения у 90% штаммов или более; + положительная реакция через 18-24 ч у 90% штаммов или более; +, (+) чаще положительная, реже замедленно положительная у 90% штаммов или более; х – различные результаты реакции; +, - чаще положительная, реже отрицательная реакция у 90% штаммов и более; +, (-) чаще положительная, реже замедленно отрицательная реакция у 90% штаммов и более. Приложение 2 Дифференциальные характеристики видов и подвидов сальмонелл
Приложение 5 Основные дифференциальные признаки сальмонелл и сходных энтеробактерий
- отрицательная реакция в течение всего срока наблюдения у 90% штаммов или более; + положительная реакция через 18-24 ч у 90% штаммов или более; +, (+) чаще положительная, реже замедленно положительная у 90% штаммов или более; х – различные результаты реакции; +, - чаще положительная, реже отрицательная реакция у 90% штаммов и более; +, (-) чаще положительная, реже замедленно отрицательная реакция у 90% штаммов и более. Приложение 6 Биохимические свойства сальмонелл
|
