Колориметрические (фотометрические) методы
Колориметрические методы определения общего белка основаны на цветных реакциях белков с хромоген-образующими реактивами или на неспецифическом связывании красителя. Среди колориметрических методов определения концентрации общего белка сыворотки наиболее распространенным считается биуретовый метод, основанный на так называемой «цветной биуретовой реакции», в ходе которой белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди с образованием соединений, окрашенных в фиолетовый цвет, интенсивность окраски зависит от концентрации общего белка в сыворотке. Биуретовый метод определения общего белка в сыворотке крови был утвержден в качестве унифицированного в 1972 г. Колориметрические методы определения общего белка сыворотки крови достаточно просты и относительно дешевы. К недостатку метода относится интерферирующее действие некоторых веществ (в том числе лекарств). Нормальное количество общего белка в сыворотке крови колеблется от 60 до 80 г/л. Плазма содержит на 2-4 г/л больше за счет фибриногена, который отсутствует в сыворотке. Пониженная концентрация белков в крови называется гипопротеинемия, повышенная – гиперпротеинемия. Причины гипопротеинемии: - недостаточное введение белка (длительное голодание, безбелковая диета); - повышенная потеря белка (при различных заболеваниях почек, кровопотерях, ожогах, новообразованиях, асцитах, сахарном диабете); - нарушение образования белка в организме: при недостаточности функции печени (гепатиты, циррозы, токсические повреждения), длительном лечении кортикостероидами, нарушении всасывания (при энтеритах, энтероколитах, панкреатитах). Гиперпротеинемия наблюдается при: - дегидратации в результате потери части внутрисосудистой жидкости (при тяжелых травмах, обширных ожогах, холере); - появлении в крови парапротеинов – патологических белков, вырабатываемых в большом количестве при миеломной болезни, при болезни Вальденстрема).
С помощью электрофореза на бумаге выделяют 5 стандартных фракций: альбумины и четыре фракции глобулинов (α1-глобулины, α2-глобулины, β-глобулины, γ-глобулины). Принцип электрофореза белков заключается в следующем: Ацетатцеллюлозная пленка, гель, специальная бумага (носитель) помещается на рамку, при этом противоположные края носителя свисают в кюветы с буферным раствором. На линию старта наносится сыворотка крови. Метод заключается в движении буферного раствора по поверхности носителя под влиянием электрического поля. Двигаясь, буферный раствор захватывает молекулы белков сыворотки. Молекулы с наибольшим отрицательным зарядом и наименьшим размером, т.е. альбумины, двигаются быстрее остальных. Наиболее крупные и нейтральные (γ-глобулины) оказываются последними. На ход электрофореза влияет подвижность разделяемых веществ, находящаяся в зависимости от следующих факторов: заряда (обычно зависит от pH), размера и формы молекул веществ, электрического поля, буфера и носителя ( учитывается его гидрофильность и адсорбционная способность).
|
