Иммунофлуоресценция.

Метки в иммунологическом

Анализе

 

 

Выполнил:

студент 5 курса 3 группы

Шульвинский Т. Э.

Преподаватель:

к. б. н. Нашкевич Н. Н.

 

Минск

 

Оглавление:

1.1 Иммунофлуоресценция. 3

1.2 Иммуноферментный метод. 6

1.3 РИА. 6

1.4 Менее популярные способы 8

Список литературы 9

 

Иммунофлуоресценция.

 

 

Иммунофлуоресценция. Метод основан на применении в качестве метки флуоресцирующих соединений. Метку химически пришивают к антителу или антигену. Это позволяет регистрировать реакцию антиген-антитело с помощью соответствующих приборов и увеличивает чувствительность анализа. Чаще всего с помощью иммунофлюоресценции определяют антигены на поверхности клеток. С этой целью тестируемые бактериальные или эукариотические клетки обрабатывают антителами, мечеными флуоресцентной меткой, а затем оценивают реакцию с помощью люминесцентного микроскопа (рис. 1).

 

Иммунофлуоресцентный метод широко используется для иммунофенотипирования клеток иммунной системы, то есть для определения набора антигенов, представленных на поверхности клетки. Как правило, с этой целью применяют наборы моноклональных антител, направленных против различных антигенов. Если используют меченые моноклональные антитела, то метод называют прямым. Если клетки обрабатывают немечеными моноклональными антителами, а затем флуоресцентно мечеными антителами, направленными против моноклональных антител, то метод называют непрямым. В этом случае моноклональные антитела называют первыми антителами, а меченые антитела против моноклональных антител вторыми антителами. Вторые антитела чаще всего являются антивидовыми, то есть направлены против иммуноглобулинов того или иного вида животных. Поскольку диагностические моноклональные антитела чаще всего являются мышиными, то используют поликлональные антитела против иммуноглобулинов мыши.

В качестве метки используют различные флуоресцирующие соединения. Наиболее распространенным является флуоресцинизотиоционат. Кроме люминесцентной микроскопии для иммунофенотипирования применяют также проточную лазерную цитофлуорометрию. Принцип метода основан на лазерном анализе флуоресценции каждой отдельной клетки, обработанной мечеными моноклинальными антителами.

С помощью иммунофлуоресценции определяют популяционный состав лимфоцитов периферической крови. Так, с помощью соответствующих моноклональных антител можно подсчитать количественное соотношение CD4-положительных и CD8-положительных Т-лимфоцитов, определив тем самым иммунорегуляторный индекс.