От изучения закономерностей функционирования генетического мате-

Риала в клетке вскоре исследователи перешли к генетическим манипуля-

Циям. Возникла новая экспериментальная технология, заключающаяся в

введении в клетки чужеродных генов. Названия «генетическая (или ген-

ная) инженерия» или «работа с рекомбинантными ДНК» эквивалентны.

Суть этой технологии заключается в воссоединении фрагментов ДНК in

vitro с последующим введением новых («рекомбинантных») генетиче-

Ских структур в живую клетку.

В 1972 г. Берг с сотрудниками создали первую рекомбинантную моле-

Кулу ДНК, состоящую из фрагмента ДНК вируса ОВ40 и бактериофага

λ dvgal с галактозным опероном E. coli. Инструментом для генетического

конструирования стали две группы ферментов – рестриктирующие эн-

Донуклеазы (рестриктазы) и лигазы. Первые необходимы для получе-

ния однородных фрагментов ДНК, вторые – для их соединения. Рестрик-

Тазы и лигазы в совокупности с другими ферментами (нуклеазами, обрат-

Ной транскриптазой, ДНК-полимеразой и др.) обеспечивают проведение

Всех генноинженерных манипуляций.

Техника генетического конструирования in vitro включает несколько

последовательных процедур (рис. 4.1):

Получение нужного гена;

Встраивание его в генетический элемент, способный к репликации

(вектор);

Введение гена, входящего в состав вектора, в организм-реципиент;