От изучения закономерностей функционирования генетического мате-Риала в клетке вскоре исследователи перешли к генетическим манипуля- Циям. Возникла новая экспериментальная технология, заключающаяся в введении в клетки чужеродных генов. Названия «генетическая (или ген- ная) инженерия» или «работа с рекомбинантными ДНК» эквивалентны. Суть этой технологии заключается в воссоединении фрагментов ДНК in vitro с последующим введением новых («рекомбинантных») генетиче- Ских структур в живую клетку. В 1972 г. Берг с сотрудниками создали первую рекомбинантную моле- Кулу ДНК, состоящую из фрагмента ДНК вируса ОВ40 и бактериофага λ dvgal с галактозным опероном E. coli. Инструментом для генетического конструирования стали две группы ферментов – рестриктирующие эн- Донуклеазы (рестриктазы) и лигазы. Первые необходимы для получе- ния однородных фрагментов ДНК, вторые – для их соединения. Рестрик- Тазы и лигазы в совокупности с другими ферментами (нуклеазами, обрат- Ной транскриптазой, ДНК-полимеразой и др.) обеспечивают проведение Всех генноинженерных манипуляций. Техника генетического конструирования in vitro включает несколько последовательных процедур (рис. 4.1): Получение нужного гена; Встраивание его в генетический элемент, способный к репликации (вектор); Введение гена, входящего в состав вектора, в организм-реципиент;
|
