Идентификацию (скрининг) и отбор клеток, которые приобрели же-

Лаемый ген или гены.

ДНК

ДНК

5’

3’ 5’

G 3’

G

G

G

A

A

A

A

A

A

T

T

T

T

T

T

C

C

C

C

Эндонуклеаза

Эндонуклеаза

Расщепленная

Плазмида

Рекомбинантная

Плазмида

Введение

Рекомбинантной

Плазмиды

В кишечную

Палочку

Плазмида

Чужеродный ген (ДНК)

Клонирование гена

Лигаза

Плазмиды

Хромосома

A A T T

С

С

С

С

T

T

T

T

T

T

T

T

T T T T

T T

T T

T T

T T

T T

T T

A

A

A

A

A

A

A

A

A A

A A

A A

A A

AA AA A A

A A

G

G

T

T

T

T

A

A

A

A

+

Рис. 4.1. Введение гена в плазмиду E. coli и клонирование рекомбинантной ДНК в клетках

(по А. Сассону, 1987).

Плазмида E.coli расщепляется рестриктазой в обеих частях ДНК с образованием на концах неспаренных

Нуклеотидов (ТТАА или ААТТ). Ген выщеплен с помощью этой же рестриктазы с образованием на концах,

Комплиментарных плазмиде, последовательностей (ААТТ и ТТАА). Обе ДНК (гена и плазмиды) сшивают с

Помощью лигазы. Гибридную плазмиду вводят в E. coli, которая при размножении образует клон, все клет-

Ки которого содержат рекомбинантную плазмиду и чужеродный ген. Ген клонирован в бактериальной

Клетке и индуцирует в ней синтез белка.

Получение генов

Получение генов возможно несколькими путями: выделением из ДНК,

Химико-ферментным синтезом и ферментным синтезом.

Выделение генов из ДНК проводят с помощью рестриктаз, катализи-