Образует рекомбинантную ДНК.Конструирование рекомбинантных ДНК При обычном введении в бактериальную клетку ДНК подвергается Ферментативной атаке, в результате которой разрушается. Чтобы этого не Происходило, используют векторные молекулы ДНК, способные при вве- дении в клетку существовать автономно, а при делениях клетки – репли- Цироваться. Вектор также несет в своем составе генетический признак, Необходимый для последующего распознавания и отбора трансгенных Организмов. Обычно в качестве маркерных генов используют гены устой- Чивости к антибиотикам. Конструирование рекомбинантных ДНК осуществляется in vitro с изо- Лированными ДНК при помощи эндонуклеаз рестрикции, которые расще- Пляют вектор в одном участке, превращая его из кольцевой формы в ли- Нейную с образованием липких концов, комплиментарных концам вводи- Мой ДНК. Комплиментарные концы вектора и вводимого гена сшиваются Лигазой. Полученную рекомбинантную ДНК с помощью той же ДНК- Лигазы замыкают с образованием кольцевой молекулы. В качестве векторов используют плазмиды и вирусы. Вирусы быстро Транспортируются из клетки в клетку, за короткое время способны быстро Заразить весь организм. Важной проблемой при их использовании являет- ся аттеньюация – ослабление патогенности для хозяина; таким образом, не
|
