Дов, а также вводить в гены участки узнавания рестриктаз, регуляторных
Последовательностей и пр. Метод состоит из химического синтеза одно- Цепочечных фрагментов ДНК (олигонуклеотидов) за счет поэтапного об- разования эфирных связей между нуклеотидами, обычно 8–16-звенных. В настоящее время существуют «генные машины», которые под контролем Микропроцессора очень быстро синтезируют специфические короткие последовательности одноцепочечной ДНК. На рис. 4.2 показана схема такой машины, сконструированной канадской фирмой «Био лоджикэлс». Нужная последовательность оснований вводится на клавишный пульт Управления. Микропроцессор открывает клапаны, через которые с помо- Щью насоса в синтезирующую колонку последовательно поступают нук- Леотиды, а также необходимые реагенты и растворители. Колонка напол- Нена бусинками кремния, на которых собираются молекулы ДНК. В дан- Ном устройстве возможен синтез цепей длиной до 40 нуклеотидов со ско- Ростью 1 нуклеотид за 30 минут. Полученные олигонуклеотиды с помо- Щью ДНК-лигазы сшиваются между собой с образованием двуцепочечно- Го нуклеотида. С помощью данного метода были получены гены А- и В- Цепей инсулина, проинсулина, соматостатина и др. Ферментный синтез гена на основе выделенной матричной РНК (мРНК) является в настоящее время наиболее распространенным мето-
|
