Рующих расщепление ДНК на участках, имеющих определенные нуклео-тидные последовательности (4–7 нуклеотидных пар). Расщепление можно Проводить по середине узнаваемого участка нуклеотидных пар; при этом обе нити ДНК «разрезаются» на одном уровне. Образующиеся фрагменты ДНК имеют так называемые «тупые» концы. Возможно расщепление ДНК Со сдвигом, при этом одна из нитей выступает на несколько нуклеотидов. Образуемые при этом «липкие» концы в силу своей комплементарности Вступают во взаимодействие. Нуклеотидную последовательность с липкими концами можно присое- Динить к вектору (предварительно обработанному той же рестриктазой), Превратить в кольцевую в результате сшивания лигазами взаимно ком- Плиментарных концов. Метод имеет существенные недостатки, так как Достаточно трудно подобрать действие ферментов для строгого вычлене- ния нужного гена. Вместе с геном захватываются «лишние» нуклеотиды Или, наоборот, ферменты отрезают часть гена, превращая его в функцио- Нально неполноценный. Химико-ферментный синтез применяют в том случае, если известна Первичная структура белка или пептида, синтез которого кодирует ген. Необходимо полное знание нуклеотидной последовательности гена. Этот Метод позволяет точно воссоздать нужную последовательность нуклеоти-
|
