Количественный анализ. Методы количественного анализа в ТСХ можно разделить на две группы:

Методы количественного анализа в ТСХ можно разделить на две группы:

· методы количественного определения непосредственно на хроматограмме;

· методы, основанные на извлечении вещества с хроматографической пластинки.

Методы первой группы базируются на том, что площадь пятен и их интенсивность окраски зависят от количества хроматографируемого вещества. Для количественного определения содержания вещества в хроматографических зонах используют два способа.

Первый способ основан на прямо пропорциональной зависимости площади пятна логарифму концентрации при нанесении постоянных объемов раствора анализируемого вещества. Площадь пятен измеряют вручную с помощью миллиметровой бумаги. Погрешность количественного определения таким способом достаточно велика и составляет 5 – 10%.

Полуколичественную оценку содержания вещества можно провести путем визуального сравнения величины окрашенных или флуоресцирующих пятен анализируемых веществ со стандартными растворами.

Второй способ основан на принципах фотометрии с использованием специальных приборов – денситометров. Денситометры позволяют измерять поглощение света веществом непосредственно на хроматограмме в режиме пропускания или отражения, а также флуоресценцию или ее тушение. В настоящее время выделяют два типа денситометров, и соответственно, два типа денситометрии:

Для проведения количественного анализа методом денситометрии необходимо предъявлять более строгие требования к хроматографическим пластинкам и условиям хроматографирования. А именно:

· использовать специальные пластинки для ВЭТСХ с гомогенным сорбентом, нанесенным равномерным слоем;

· наносить, одинаковые размеры стартовых пятен точно градуированными микрошприцами или капиллярными пипетками;

· соблюдать хроматографические условия, обеспечивающие постоянное парциальное давление паров элюента в камере и подбирать состав подвижной фазы, при котором достигается четкое разделение пятен;

· в случае если для обнаружения веществ используется химическое детектирование, то опрыскивание пластинки реагентом необходимо проводить равномерно с получением контрастных пятен.

Погрешность количественного определения с помощью денситометрии не превышает ± 2%.

Ко второй группе относятся методы, в которых хроматографическую зону переносят с пластинки в подходящую емкость, а затем экстрагируют анализируемое вещество с сорбента подходящим растворителем. Далее осуществляют анализ экстракта с помощью различных инструментальных методов: спектроскопических, электрохимических и др. Этот метод является более трудоемким, хотя при его использовании может быть достигнута большая точность.