Хід роботи. 1. Занести в таблицю експериментальні точки: концентрації субстрату і відповідні їм швидкості ферментативної реакції.

Домашнє завдання:

1. Занести в таблицю експериментальні точки: концентрації субстрату і відповідні їм швидкості ферментативної реакції.

2. Обчислити обернені величини 1/[S] і 1/V та записати їх у таблицю.

3. Позначити експериментальні точки з таблиці на графіку в осях [S] і V.

4. Позначити обчислені точки з таблиці на графіку в осях 1/[S] і 1/V, апроксимувати їх прямою лінією, продовживши її пунктиром до перетину з віссю 1/[S] як на рис.2, і вручну визначити максимальну швидкість ферментативної реакції та константу Міхаеліса.

5. Записати одержані результати в таблицю над косими лініями.

Аудиторне завдання:

6. Запустити файл kinetics.exe.

7. Натиснути F3 та “Enter data yourself”.

8. Занести дані з таблиці: концентрацію субстрату [S] – в колонку X, швидкість ферментативної реакції V – в колонку Y. Натиснути ”Esc”.

9. Натиснути F2 і вибрати обчислення за рівнянням Міхаеліса – Ментен (опція a). Максимальну швидкість V_max вважати змінною.

10. Натиснути F4 і записати в таблицю результати обчислень під косими лініями: константу Міхаеліса K_M та максимальну швидкість реакції V_max. Натиснути ”Esc”.

11. Натиснути F5 та “ Normal plot” і подивитись на моніторі графік залежності V від [S]. Зарисувати графік V від [S] у звіт лаброботи, врахувавши вибраний програмою масштаб. Провести на графіку пунктирну горизонтальну лінію, що позначає максимальну швидкість ферментативної реакції. Знайти і позначити на графіку константу Міхаеліса як на рис.1.Натиснути ”Esc”.

12. Натиснути “ Double-reciprocal plot” і подивитись на моніторі графік за­лежності 1/V від 1/[S]. Зарисувати графік 1/V від 1/[S] синім кольором у звіт лаброботи (якщо він відрізняється від одержаного вручну), врахувавши вибраний програмою масштаб. Натиснути ”Esc”.

13. Зробити висновок, у якому порівняти результати обчислень, одержані вручну та за допомогою комп’ютера.

 

№	[S]	V	1/[S]	1/V	KM	Vmax
1

 

Контрольні питання

1. Рівняння реакції взаємодії фер­менту й субстрату.

2. Кінетичне рівняння для швидкості зміни кон­центрації фермент-субстратного комплексу.

3. Вираз для концентрації фермент-субстратного ком­плексу у стаціонарному стані.

4. Вивести рівняння Міхаеліса – Ментен.

5. Графік v([S]).

6. Чому для цієї залежності характерне насичення?

7. Константа Міхаеліса.

8. Визначити максимальну швидкість ферментативної реакції, якщо константа Міхаеліса становить 0,4 моль/л, а швидкість ферментативної реакції при концентрації субстрату 0,4 моль/л становить 0,1 моль/хв.

9. Порядок реакції взаємодії фер­менту й субстрату.

10. Графічний метод Лай­нуївера – Берка.

11. Що і як можна визначити з графіка Лайнуївера – Берка?

Рекомендована література

1. Кравець В.І. “Біофізика”. Посібник для студентів університетів спеціальності “біологія”. Івано-Франкiвськ, 2005, 256 с. ─ с.71-73.

2. Костюк П.Г., Гродзинский Д.М., Зима В.Л. и др. Биофизика. – К.: Вища школа, 1988, – 504с. ─ c.102-104.