ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ. Раствор KH2PO4 был приготовлен растворением навески 1.71г в 200мл воды
Растворы реагентов. Раствор KH2PO4 был приготовлен растворением навески 1.71г в 200мл воды. Значение pH раствора отрегулировали посредством pH-метра, добавляя по каплям водный раствор NaOH. Приготовленный раствор количественно перенесли в мерную колбу на 250,0 мл, довели до метки водой и использовали в качестве буферного в эксперименте. Раствор иодида калия приготовлен растворением навески 0,85г в 8мл буфера. К полученному раствору добавили 2 мл 9% раствора молибдата натрия Na2MoO4. Был получен раствор иодида калия с концентрацией 0,4997моль/л. Раствор β-D-глюкозы был приготовлен навески 1,05г в 10мл буфера. Концентрация раствора 0,5556 моль/л. Эксперимент. В кварцевую кювету спектрофотометра длиной 1см вносили заданные количества реагентов, потом добавляли раствор глюкозооксидазы (10мкл), перемешивали и записывали график интенсивности поглощения от времени. Каждый опыт повторяли не менее двух раз для получения правильных результатов и уменьшения случайной ошибки. После этого изменяли концентрацию β-D-глюкозы (субстрата) в пробе и вновь проводили измерения. Прибором регистрировалась увеличение оптической плотности во времени, что говорило об увеличении концентрации в анализируемом растворе. Изменение концентрации поглощающего вещества можно рассчитать согласно закону Бугера-Ламберта-Бэра из изменения оптической плотности раствора.. Величина коэффициента экстинкции на данной длине волны была нам известна (2,5·104 л/(моль·см)). Из величины временной развёртки (4,4мин) было определено время каждого опыта, что позволило рассчитать скорость превращения. Среднюю скорость определяли как среднее арифметическое результатов каждого опыта. В таблице приведена скорость ферментативной реакции в расчёте на 1мкл фермента.
|
