Опыт 2. Обнаружение пептидной связи в белках.

 

б) Нингидриновая реакция (на аминогруппы).

К 2-3 мл разбавленного раствора белка добавляют 3-4 капли 1% раствора нингидрина в 95% растворе ацетона. Раствор перемешивают и ставят в водяную баню при 70°С на несколько минут. Какие изменения наблюдаются? Записать схему происходящих реакций.

 

а) В пробирку наливают 1-2 мл 10% раствора белка куриного яйца, прибавляют 2-3 мл 30% раство­ра гидроксида натрия и хорошо перемешивают. За­тем добавляют несколько капель 1% раствора суль­фата меди и снова хорошо перемешивают. Что на­блюдается?

Для сравнения: на стеклянной пластинке нагревают несколько кристаллов мочевины над пламенем газо­вой горелки. Пластинку охлаждают и к полученному биурету добавляют по несколько капель 10% раствора гидроксида натрия и 1% раствора сульфата меди. При перемешивании развивается интенсивное фиолетовое окрашивание. Сравнить с предыдущим опытом и сде­лать выводы. Записать уравнение реакции образова­ния комплексной соли меди с биуретом. Сделать вывод об аналогии реакции с пептидной связью белка.

 

Опыт 3. Выделение белка из раствора.

а) Высаливание белка.

Наливают в пробирку 1-1,5 мл раствора белка, до­бавляют равный объем насыщенного раствора суль­фата аммония. Появляется муть от выпавшего осад­ка.

Осаждение белков солями является обратимым про­цессом, и при добавлении воды белки снова раство­ряются.

б) Осаждение белков при нагревании (свертывание белков).

В пробирку наливают 2 мл раствора белка и нагре­вают ее, не доводя до кипения. Что наблюдается? В другую пробирку наливают 2 мл раствора белка и 1 каплю 1% раствора уксусной кислоты и также нагре­вают. Осадок белка выпадает быстрее. Обратим ли про­цесс?

в) Осаждение белков концентрированными мине­ральными и органическими кислотами.

В 3 сухие пробирки наливают по 1-2 мл концентри­рованных азотной, серной и соляной кислот соответ­ственно. Наклоняют каждую пробирку и осторожно, по стенке, приливают из пипетки по 0,5 мл исследуе­мого раствора белка так, чтобы он не смешивался с кислотой. В месте соприкосновения двух жидкостей появляется белый аморфный осадок, который при встряхивании в азотной кислоте увеличивается, а в двух других растворяется. В четвертую пробирку наливают 2-3 мл раствора бел­ка и добавляют несколько капель 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Образуется осадок. Сделать вывод о влиянии различных кислот на способность белков к осаждению.

 

Раздел 2. Углеводы: моносахара, дисахара и полисахариды

Оборудование: предметные стекла, пробирки, пипет­ки, водяная баня, стаканы, стеклянные палочки.

Реактивы: 1%-ный раствор глюкозы, 10%-ный рас­твор гидроксида натрия, гидрокарбонат натрия сухой, 10%-ный раствор серной кислоты, реактив Селива­нова (раствор 0,5: резорцина в 100 мл разбавленной (1:1) соляной кислоты), 1%-ный раствор фруктозы, 2%-ный раствор сульфата меди, раствор сахарозы, ам­миачный раствор оксида серебра.

Опыт 1. Восстанавливающие свойства глюкозы

а) На предметное стекло помещают 2-3 капли рас­твора сульфата меди и приливают 2-3 капли раствора гидроксида натрия. К выделившемуся гидроксиду меди добавляют равное количество раствора глюкозы и перемешивают. Как изменяется окраска? Почему? Записать уравнения реакций.

б) Предметное стекло с содержимым опыта а) помещают над стаканом с горячей водой. Какие изменения наблюдаются? Записать уравнение реакции окисления глюкозы.

в) К аммиачному раствору оксида серебра на предметном стекле добавляют 2-3 капли раствора глюкозы. Смесь осторожно нагревают над стаканом с горячей водой. Что наблюдается? Записать уравнения ре­акции.

 

Опыт 2. Обнаружение фруктозы реакцией Селиванова

В две пробирки наливают по 2 мл реактива Селива­нова. В одну пробирку прибавляют 2 капли 1%-ного раствора фруктозы, а в другую - 2 капли 5%-ного рас­твора глюкозы. Обе пробирки одновременно поме­щают в водяную баню с температурой воды около 80°С и выдерживают при этой температуре в течении 8 мин.

Сравнить окраску растворов в пробирках с глюко­зой и с фруктозой. Записать схему реакции.