Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Молекулярно-ситовая хроматография




Воснове этого варианта хроматографии лежит прин­цип разделения смеси веществ по их молекулярным разме­рам или молекулярным массам. Его называют также гель-фильтрацией или гель-хроматографией. Метод широко ис­пользуют для выделения и очистки биополимеров - белков, пептидов, поли- и олигосахаридов, нуклеиновых кис­лот и даже клеток, например, тромбоцитов.

В качестве носителей в молекулярно-ситовой хромато­графии используются различные гели с трехмерной сетча­той структурой - декстрановые (сефадекс), полиакриламидные (биогель Р), агарозные (сефароза) или на основе стирола и дивинилбензола, простые силикагели, а также пористые стеклянные гранулы. Все гели и стекла имеют поры строго определенных размеров, по возможности, не содержат ионогенных групп и не обладают химическим или биологическим сродством к анализируемым вещест­вам. Гелями называют дисперсные системы с жидкой или газообразной дисперсионной средой, в которой частицы твердой дисперсной фазы связаны между собой молеку­лярными силами сцепления различной природы.

Молекулярно-ситовая хроматография может быть вы­полнена в колоночном и тонкослойном вариантах. Пре­имущество отдают колоночному варианту.

Если набухшие гранулы декстранового геля (сефадекса) поместить вместе с растворителем в вертикальную ко­лонку и внести на поверхность смесь веществ, то разделе­ние смеси веществ происходит за счет того, что в поры ге­ля могут проникать только вещества, размеры молекул которых не превышают размеров пор. В результате диф­фузий (проникновения) внутрь пор геля молекулы мень­шего размера элюируются с геля позже, чем более круп­ные молекулы, не проникающие в поры геля (рис.24.12).

 

Рис. 24.12. Схема опыта по молекулярно-ситовой

хроматографии.

(Показано более быстрое продвижение крупных молекул

белка.)

• - большие молекулы; О - поры геля; • - малые молекулы

 

Декстрановые и полиакриламидные гели широко исполь­зуются для освобождения органических веществ, от ионов неорганических солей. Для обессоливания белков подбира­ют мелкопористые сефадексы. Высокомолекулярные веще­ства (ВМВ) (белки, полисахариды) не проникают в поры этих сефадексов, а неорганические соли, наоборот, проникают. При добавлении растворителя в колонку ВМВ выходят из нее первыми, а соли выходят из колонки значительно позже.

Молекулярно-ситовая хроматография применяется и для определения молекулярных масс белков.







Дата добавления: 2014-10-22; просмотров: 3692. Нарушение авторских прав


Рекомендуемые страницы:


Studopedia.info - Студопедия - 2014-2020 год . (0.001 сек.) русская версия | украинская версия