Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Аффинная (биоспецифическая) хроматография




 

Аффинная хроматография - это метод очистки и разде­ления белков, основанный на их избирательном взаимо­действии с лигандом, ковалентно связанным с инертным носителем (иммобилизованный лиганд). В качестве лигандов используют соединения, взаимодействия которых с разделяемыми веществами основано на биологической функции последних. Так, при разделении ферментов лигандами служат их субстраты, ингибиторы или коферменты. Главная особенность, которая обусловливает высокую эффективность аффинной хроматографии, состоит в том, что разделение основано на различии не физико-химиче­ских признаков молекулы (заряда, формы и размера), а специфических функциональных свойств, отличающих данный фермент от множества других биополимеров.

Схематически (рис. 24.13) процесс разделения веществ с помощью аффинной хроматографии можно представить следующим образом. Колонку заполняют носителем, прочно связанным с каким-нибудь биологически актив­ным веществом (лигандом). Пропускают через колонку анализируемую смесь веществ, к одному из которых ли­ганд обладает биологическим сродством. Лиганд из всей смеси веществ выбирает «свое» вещество и образует с ним биоспецифический комплекс. В результате этого вещество останется в колонке связанным с лигандом, а все осталь­ные компоненты смеси пройдут через колонку, не задер­живаясь. После этого можно изменить буферный раствор, подобрав условия, при которых комплекс лиганда с избранным им веществом распадается и чистое вещество вы­мывается этим буферным раствором из колонки.

Рис. 24.13. Механизм аффинной хроматографии:

_

Л - лиганд; Л — иммобилизованный лиганд; М — биологически

_

активное вещество; МЛ - биоспецифический комплекс; ∆ - примеси; О - несорбирующиеся компоненты смеси

 

В настоящее время метод аффинной хроматографии применяется для выделения и очистки многих природных белковых молекул (антител, антигенов, ингибиторов, фер­ментов, гормонов, клеточных рецепторов), специфических пептидов, гликопротеидов и гликолипидов, полисахари­дов, моносахаридов, нуклеиновых кислот и нуклеотидрв, липидов, субклеточных частиц и многих видов клеток.

 

ВОПРОСЫ

1. Что такое хроматография?

2.Какие признаки положены в основу классификации хроматографических методов?

3. Что положено в основу адсорбционной хроматографии?

4. Какие адсорбенты, и растворители применяются в ад­сорбционной хроматографии?

5. От каких факторов зависит молекулярная адсорбция из растворов?

6. Где используется молекулярная адсорбция?

7. Что такое коэффициент распределения?

8. Какие варианты газовой хроматографии вы знаете? Что используется в газовой хроматографии в качестве по­движной фазы?

9. Из каких основных частей состоит газовый хромато­граф?

10. Что такое хроматограмма?

11. Как проводится анализ веществ методом тонкослойной хроматографии?

12. Как обнаруживаются разделяемые вещества в тонком слое сорбента и каким образом затем количественно оп­ределяются?

13. Что используется в качестве носителя неподвижной жидкой фазы в бумажной хроматографии?

14. Какие виды бумажной хроматографии различают в зави­симости от техники выполнения?

15. Что такое иониты? Напишите реакции ионного обмена на ионитах.

16. В каких отраслях народного хозяйства применяются ио­ниты?

17. С какой целью используется молекулярно-ситовая хроматография?

18. Что применяется в качестве носителей в молекулярно-ситовой хроматографии?

19. Какова главная особенность аффинной хроматографии в отличие от других хроматографических методов?

20. Для выделения и очистки каких веществ используется метод аффинной хроматографии?

 

ОТВЕТЫ НА ВОПРОСЫ ТЕСТОВОГО САМОКОНТРОЛЯ

  Тема Ответы
    Кислотно-основное титрование   Оксидиметрия 1 бг; 2абв; 3абв; 4бг; 5абв; 6ав; 7г; 8абв; 9бг; 10ав   1г; 2а; 3в; 4г; 5б; 6б; 7д; 8в; 9а; 10д; 11г; 12в; 13а; 14д; 156; 16а; 17д; 18в; 19г; 20б

 

 







Дата добавления: 2014-10-22; просмотров: 5598. Нарушение авторских прав


Рекомендуемые страницы:


Studopedia.info - Студопедия - 2014-2020 год . (0.002 сек.) русская версия | украинская версия