Определение содержания общего азота в молоке микрометодом и расчет по азоту количества белка

Органические вещества молока при нагревании с крепкой серной кислотой окисляются до углекислоты и воды, а азот переходит в сернокислый аммоний. Сернокислый аммоний переводят в аммиак, добавляя крепкую щелочь. Аммиак улавливают 0, 01 н. раствором Н₂ S0₄, находящимся в приемной колбе.

Этот химический процесс можно изобразить следующими реакциями:

(NH₄)₂ SO₄ + 2NaOH = Na₂ SO₄ + 2H₂O + 2NH₃;

2NH₃ +H₂SO₄ = (NH₄)₂SO₄.

По количеству 0, 01 н. раствора Н₂ SO₄ (в мл), связавшейся с аммиаком, вычисляют количество азота в исходной навеске молока. При расчетах исходят из того, что 1 мл 0, 01 н. H₂SO₄ связывает 0, 14 г азота. Для вычисления содержания белка в молоке количество азота умножают на коэффициент 6, 38 (получен в результате деления 100 на среднее содержание азота в белке молока).

Приготовление индикатора Ташира. Приготовить два раствора: 1) 0, 1 %-ный спиртовой раствор метилрота красного – в мерной колбе на 100 мл в этиловом спирте растворить 100 мг метилрота; 2) 0, 1 %-ный спиртовой раствор метиленовой сини (100 мг сини растворить в этиловом спирте). Далее 40 мл 0, 1 %-ного раствора метилрота смешать с 10 мл 0, 1 %-ного раствора метиленовой сини. Из полученной смеси приготовить рабочий раствор путем добавления к 25 мл смеси 50 мл дистиллированной воды и 25 мл этилового спирта.

Техника определения:

1. Пипеткой отмерить в колбу Кьельдаля 5 мл молока.

2. В колбу с молоком влить 20 мл концентрированной серной кислоты, смывая капли молока, если они попали на горло колбы. Добавить около 10-20 мг селена. Вставить в горло колбы воронку или стеклянную грушу.

3. В вытяжном шкафу кипятить содержимое колбы вначале на слабом огне (через асбестовую сетку), а затем на более сильном до полного
просветления. Сжигание обычно продолжается несколько часов. После
просветления раствора кипятить его еще полчаса.

4. В остывший прозрачный раствор добавить около 50 мл воды и
перенести жидкость в мерную колбу на 250 мл. Колбу для сжигания
сполоснуть 6 раз водой (по 20-25 мл), сливая ее в мерную колбу.
Не закрывая колбу пробкой, перемешать раствор и после охлаждения
довести его объем водой до метки; закрыть колбу пробкой и тщательно перемешать содержимое.

5. Аммиак отгонять на аппарате (рис. 3). Перед работой через прибор необходимо пропускать пар в течение 15-20 мин Паром же обработать и приемную коническую колбу емкостью 100 мл.

 

 

 

Рис. 2 Аппарат для отгонки аммиака:

1 – парообразователь; 2 – трубка для отвода пара в момент перемены проб; 3 – сборник отработанной жидкости; 4 – воронка (с краном а) для заливки исследуемого раствора; 5 – сосуд для отгонки; 6 – холодильник; 7 – приемная колба; б, в – зажимы.

6. В приемную колбу на 100 мл (7) отмерить 10 мл 0, 01 н. раствора H₂SO₄ и влить 3-5 капель индикатора Ташира. Конец трубки холодильника (6) погрузить в приемную колбу с кислотой.

7. Отмерить пипеткой 10 мл исследуемого раствора, находящегося в мерной колбе, и аккуратно влить его через воронку (4) аппарата в сосуд для отгонки (5). Ополоснуть воронку 2 раза небольшими порциями воды, а затем влить через нее же 8 мл 40 %-ного раствора NaOH и закрыть кран. Кран (а) приемной воронки закрывают каждый раз (после внесения исследуемого раствора, промывной воды и щелочи). В сосуде (5) для отгонки объем жидкости должен составлять не более 50 мл. Далее пропускают пар через сосуд для отгонки аммиака в течение 10 мин.

Окончание отгонки проверяют красной лакмусовой бумажкой, на которую наносят каплю дистиллята, вытекающего из трубки холодильника.

8. После окончания отгонки конец трубки холодильника вынуть из кислоты, опустив приемную колбу, и продолжать отгонку, еще 2-3 мин. Затем конец трубки ополоснуть водой и прекратить поступление пара, зажав резиновую трубку от парообразователя зажимом (б), а зажим (в) открыть для выхода пара из парообразователя.

9. Не связанную с аммиаком серную кислоту в приемной колбе
оттитровать 0, 01 н. раствором NaOH до перехода розового цвета в зеленый.

10. Для внесения поправки на чистоту реактивов проделать контрольное определение. Для этого вместо молока взять 5 мл воды, все последующие операции выполнить так, как описано выше.

Рассчитать количество азота (в мг) в 100 мл молока по формуле:

 

N = [(ar₁ - br₂) 0, 14 - п ] × (2)

 

где N – количество азота в 100 мл молока (мг); а – 0, 01 н. H₂SО₄ в приемной колбе (мл); г - поправка к титру 0, 01 н. H₂SO₄; b ~ 0, 01 н. NaOH, пошедшего на титрование (мл); г₂ – поправка к титру 0, 01 и. NaOH; n – поправка на реактивы, вычисленная по контрольному определению; 0, 14 - азот (мг), эквивалентный 1 мл 0, 01 н. H₂SO₄; 250 – степень разведения молока; 5 – количество молока, взятого для сжигания (мл); 10 – количество исследуемого раствора, взятого для отгонки аммиака (мл); 100 – коэффициент для пересчета на 100 мл.

11. Для пересчета на процентное содержание белков в молоке надо количество азота (г), содержащееся в 100 мл молока, разделить на его плотность и умножить на коэффициент 6, 38.

Пример. Рассчитать содержание белков в молоке. В приемную колбу взято 10 мл 0, 01 н. HSO; поправка к титру кислоты 1, 000. На титрование содержимого приемной колбы пошло 1, 90 мл 0, 01 н. NaOH; поправка к титру, щелочи 1, 000; поправка на реактивы равна 0. Плотность молока 1, 032.

 

или 0, 5607 г азота в 100 мл молока.

Содержание белков