Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Специфичность действия амилазы





1. В одну пробирку вносят 2 мл 0.25%-ного раствора крахмала, во вторую – 2 мл 2%-ного раствора сахарозы. Затем в пробирки добавляют по 1 мл разведенного препарата амилазы слюны и перемешивают содержимое.

2. После инкубации в термостате при температуре 38-40°С в течение 10 мин пробирки охлаждают и определяют в них содержание глюкозы по реакции Троммера:

- для определения содержания глюкозы из каждой пробирки отбирают по 3 мл раствора;

- добавляют по 1 мл 10% раствора NaOH и по 5 капель 1% раствора CuSO4;

- пробирки нагревают до появления окраски;

- наличие окрашивания свидетельствует о присутствии глюкозы в анализируемой пробе.

3. Полученные результаты представить в виде следующей таблицы:

 

№ пробирки Субстрат Проба Троммера  
 
1. Крахмал    
2. Сахароза    

 

 

Оформление работы

 

К занятию:

1. Кратко законспектировать теоретические материалы по лабораторной работе.

Во время занятия:

2. Описать этапы работы.

3. Оформить результаты в виде графиков и таблиц.

4. Сделать выводы по каждому из опытов


Лабораторная работа № 6

 

Тема: Кинетика ферментативных реакций. Ингибиторный анализ  
Цель работы: Определение основных кинетических параметров, ферментативных реакций – константы Михаэлиса и максимальной скорости реакции. Определение характера ингибирующего действия сульфата меди на скорость реакции расщепления крахмала.

 

Оборудование и материалы:

· Спектрофотометр Solar PV 1251B

· Кюветы стеклянные

· pH-метр

· Мешалка магнитная

· Якоря магнитные

· Термостат

· Пробирки

· Штативы для пробирок

· Цилиндры мерные на 10 мл и 100 мл

· Стаканы стеклянные градуированные на 10 и 100

· Колбы на 100-250мл

· Стакан на 300 мл

· Автоматические микропипетки

· палочки стеклянные

· Бумага миллиметровая

 

Реактивы:

· Амилаза бактериальная

· Крахмал, 0.25% раствор

· Ацетилтиохолин йодид

· Ацетилхолин бромид

· Дитиобиснитробензойная кислота

· Бикарбонат натрия

· Гуинидин сульфат

· Раствор Люголя (йод, 1% раствор в KJ, 2, 5%)

· Сульфат меди (CuSO4), 2% раствор

· Хлорид натрия (NaCl), 1% раствор

· Вода дистиллированная

 

 


Теоретическое часть

 

Кинетика ферментативных реакций

Уже в ранних исследованиях по влиянию концентрации реагента на скорость ферментативных реакций была обнаружена очень важная особенность ферментативного катализа, которая заключается в сложном характере кинетики этих реакций. Так, при низких концентрациях реагента (или субстрата) реакция протекает в соответствии с уравнением первого порядка. При высоких концентрациях субстрата скорость перестает зависеть от концентрации и, таким образом, реакция в этих условиях протекает в соответствии с уравнением нулевого порядка. Общий вид зависимости скорости ферментативной реакции от концентрации субстрата при такой двухступенчатой кинетике приведен на рис. 6.1. При высоких концентрациях субстрата весь фермент оказывается связанным с субстратом, и скорость реакции будет максимальной. Другими словами, в реакциях, катализируемых ферментами, стадией, определяющей скорость процесса, будет стадия распада комплекса на фермент и продукт.

 

 

Рис. 6.1 Зависимость скорости ферментативной реакции от концентрации субстрата.

 

Итак, начальная скорость ферментативной реакции, обозначенная на рис. 6.1 символом V 0 (скорость, измеряемая за период, когда израсходована небольшая часть субстрата) увеличивается по мере роста концентрации субстрата в реакционной смеси. При неизменности остальных условий (концентрации фермента [ Е ], концентрации кофакторов, температуры, значения рН) это увеличение начальной скорости ферментативной реакции, в зависимости от концентрации субстрата происходит до тех пор, пока не наступит состояние насыщения фермента субстратом. Скорость реакции, измеренная в условиях насыщения, уже не зависит от дальнейшего повышения концентрации субстрата. Она достигает максимального значения, называемого максимальной скоростью реакции, Vmax, которая далее остается постоянной.

В ферментативной кинетике обычно используют значительный молярный избыток субстрата по сравнению с концентрацией фермента. Например, если фермент с молекулярной массой 100.000 взаимодействует с субстратом с молекулярной массой 100 и оба компонента присутствуют в реакционной смеси в концентрации 1 мг/мл, каждый, то на один моль фермента будет приходиться 1000 молей субстрата. В клетке наиболее реальными являются следующие численные значения концентраций фермента и субстрата: [ E ] = 0, 1 мкг/мл = 10 – 9 М, [ S ] = 0, 1 мг/мл = 10 – 3 М, т.е. молярный избыток субстрата по отношению к ферменту составляет величину, равную 106. Даже при уменьшении [ S ] в 100 раз, его концентрация все еще будет 10.000-кратно превышать концентрацию фермента.

 







Дата добавления: 2014-11-10; просмотров: 885. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!




Аальтернативная стоимость. Кривая производственных возможностей В экономике Буридании есть 100 ед. труда с производительностью 4 м ткани или 2 кг мяса...


Вычисление основной дактилоскопической формулы Вычислением основной дактоформулы обычно занимается следователь. Для этого все десять пальцев разбиваются на пять пар...


Расчетные и графические задания Равновесный объем - это объем, определяемый равенством спроса и предложения...


Кардиналистский и ординалистский подходы Кардиналистский (количественный подход) к анализу полезности основан на представлении о возможности измерения различных благ в условных единицах полезности...

Неисправности автосцепки, с которыми запрещается постановка вагонов в поезд. Причины саморасцепов ЗАПРЕЩАЕТСЯ: постановка в поезда и следование в них вагонов, у которых автосцепное устройство имеет хотя бы одну из следующих неисправностей: - трещину в корпусе автосцепки, излом деталей механизма...

Понятие метода в психологии. Классификация методов психологии и их характеристика Метод – это путь, способ познания, посредством которого познается предмет науки (С...

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ ДЛЯ ИНЪЕКЦИЙ К лекарственным формам для инъекций относятся водные, спиртовые и масляные растворы, суспензии, эмульсии, ново­галеновые препараты, жидкие органопрепараты и жидкие экс­тракты, а также порошки и таблетки для имплантации...

Ваготомия. Дренирующие операции Ваготомия – денервация зон желудка, секретирующих соляную кислоту, путем пересечения блуждающих нервов или их ветвей...

Билиодигестивные анастомозы Показания для наложения билиодигестивных анастомозов: 1. нарушения проходимости терминального отдела холедоха при доброкачественной патологии (стенозы и стриктуры холедоха) 2. опухоли большого дуоденального сосочка...

Сосудистый шов (ручной Карреля, механический шов). Операции при ранениях крупных сосудов 1912 г., Каррель – впервые предложил методику сосудистого шва. Сосудистый шов применяется для восстановления магистрального кровотока при лечении...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2025 год . (0.009 сек.) русская версия | украинская версия