ТЕМЫ ДЛЯ РЕФЕРАТИВНЫХ СООБЩЕНИЙ. 1. Функции НАДФН в метаболизме

1. Функции НАДФН в метаболизме. Реакции, сопровождающиеся образованием НАДФН. Реакции синтеза веществ с его участием.

Молекулярные механизмы развития сахарного диабета I и II типов. Биохимические механизмы быстрых и отсроченных осложнений сахарного диабета.

Лабораторная работа 1

Тест толерантности к глюкозе

Тест толерантности к глюкозе (проба с сахарной нагрузкой) является информативным тестом для выявления сахарного диабета на ранних этапах, нарушений гликогенообразовательной функции печени и оценки состояния тонкого кишечника.

Принцип

Тест толерантности к глюкозе основан на определении концентрации глюкозы в крови через определенные промежутки времени после приема глюкозы внутрь.

Концентрация глюкозы в крови определяется глюкозооксидазным методом (см Тема 8.2.).

Проведение теста толерантности к глюкозе

В клинико-диагностических лабораториях исследуют пробы капиллярной крови, взятой натощак и через определенные промежутки времени после нагрузки глюкозой. Тест проводят следующим образом:

У обследуемого натощак берут кровь из пальца, затем дают глюкозу с теплой водой или слабым чаем. Детям в возрасте от 1, 5 до 3 лет рекомендуется давать глюкозу из расчета 2, 0 г на 1 кг массы тела, от 3 до 12 лет – 1, 75 г/кг, после 12 лет – 1, 25 г/кг. Взрослые принимают глюкозу в количестве 1, 0‑ 1, 5 г/кг. Через 30, 60, 90 и 120 минут после приема глюкозы повторно берутся пробы крови. Далее определяют концентрацию глюкозы в пробах.

На практическом занятии метод сахарной нагрузки проводится с модельными образцами сыворотки крови, взятыми до глюкозной нагрузки, через 30, 60 и 120 минут после нагрузки. Во всех взятых пробах определяют концентрацию глюкозы глюкозооксидазным методом (см. Тема 8.2.).

Материал исследования

Три набора модельных образцов сыворотки крови, содержащие нормальные, сниженные и повышенные концентрации глюкозы.

Реактивы

Рабочий реагент, содержащий фенол, глюкозооксидазу, пероксидазу, 4‑ аминоантипирин в калиево‑ фосфатном буфере.

Стандартный раствор глюкозы, 5, 5 ммоль/л.

Определение концентрации глюкозы

	Опытные пробы, мл	Стандартная проба, мл
до нагрузки	время после нагрузки
30 минут	60 минут	120 минут
Рабочий раствор Сыворотка крови Стандарт глюкозы	2, 0 0, 02 ––	2, 0 0, 02 ––	2, 0 0, 02 ––	2, 0 0, 02 ––	2, 0 –– 0, 02
	Содержимое пробирок перемешивают, инкубируют при 37°С в течение 15 минут. Измеряют оптическую плотность при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр)

Расчет

В каждом образце крови рассчитывают концентрацию глюкозы по формуле:

Концентрация глюкозы, ммоль/л = , где

Е_оп и Е_ст – оптическая плотность опытной и стандартной проб,
С_ст – концентрация стандартного раствора глюкозы.

На основании полученных данных строят график, откладывая на оси абцисс время взятия крови, а на оси ординат – найденное содержание глюкозы в крови. Полученный график называется гликемической или сахарной кривой.

Также рассчитывают коэффициенты Бодуэна и Рафалького:

Коэфф. Бодуэна = , где

С_макс и С_исх – соответственно максимальная и исходная
концентрация глюкозы в крови во время теста,

Коэфф. Рафальского = , где

С_исх и С_конеч – соответственно исходная концентрация глюкозы и
концентрация глюкозы в крови через 2 часа после начала теста.