Флуориметрический анализ

В свою очередь фотолюминесценция оценивается временем, в течение которого свечение падает до определенного уровня (как правило, в е раз) после прекращения возбуждения. Кратковременная фотолюминесценция называется флуоресценцией. Ее длительность определяется временем перехода молекулы из возбужденного состояния в равновесное и равна 10^–8–10^–9 с. Наряду с кратковременной, практически мгновенной, фотолюминесценцией существуют вещества, длительность излучения которых составляет от долей секунд до нескольких часов. Такая фотолюминесценция называется фосфоресценцией.

В медицинской лабораторной практике широко используется именно флуоресцентный анализ, который по методу применения можно разделить на две группы.

К первой относятся методы определения собственной флуоресценции исследуемого объекта, которой объект обладает, или которая появляется в результате химической реакции.

Ко второй группе относятся методы, в которых исследуемое вещество метится специальными хромофорами. Введение флуоресцентной метки в той или иной мере искажает исходные свойства объекта, но зато позволяет работать с меньшим количеством вещества.

Благодаря высокой чувствительности и избирательности флуоресцентные методы анализа по объему фотометрических исследований в медицинской лабораторной практике занимают второе место после абсорбционных методов анализа.

Направление потоков световой энергии, поясняющий принцип работы флуориметров, показан на рис. 4.4.

1 – источник световой энергии для возбуждения
(газоразрядная лампа, лампа накаливания, импульсная лампа);

2 – полосовой фильтр, пропускающий поток световой энергии
для возбуждения в полосе длин волн Δλ₁;

3 – кювета с исследуемой средой;

4 – полосовой фильтр, пропускающий поток излученной световой
энергии в полосе длин волн Δλ₂;

5 – фотоприемник;

φ _о – интенсивность падающего потока световой энергии в полосе
длин волн Δλ₁ для возбуждения исследуемого раствора;

φ _И – интенсивность потока световой энергии излучения, вызванного
возбужденным исследуемым раствором с максимумом излучения λ₂;

Δφ _и - интенсивность потока световой энергии излучения в полосе длин волн Δλ₁.

Рис. 4.4 Направление световых потоков при флуориметрии

Источник световой энергии возбуждения (1) совместно с полосовым фильтром (2) формирует световой поток, как правило, в ультрафиолетовой области в полосе длин волн Dl₁. Поток возбуждения с максимумом l₁ пронизывает кювету (3), в которой находится исследуемое вещество, способное люминесцировать и тем самым стать другим источником излучения, имеющим максимум l₂. Пройдя полосовой фильтр (4), световая энергия возбужденного источника в полосе длин волн Dl₂ попадает на фотоприемник (5).

Подробно теоретические основы метода флуоресцентного анализа и его техническая реализация будут рассмотрены ниже.