Методика фотометрического определения аминокислот.

Сущность метода:

Для определения концентрации аминокислот используется анализ, основанный на переводе аминокислот в растворимые медные соли и их последующем фотометрическом определении. Для измерений используется фотоэлектрокалориметр КФК-2. Рассеянный свет можно считать фиктивно поглощенным, и поэтому есть все основания принимать, что закономерности рассеяния света подчиняются уравнению Бугера-Ламберта-Бера.

Реактивы

1) 0,16 моль/л раствор сульфата меди;

2) Раствор фосфата натрия. Растворяют 64,5 г Na₂HPO₄∙12H₂O в 0,5л воды без углекислоты, и после добавления 7,2 г NaOH, доводят дистиллированной водой до 1,000 л;

3) Боратный буфер с рН=8,9. Готовят доведением 80,5 мл 0,05 М раствора тетрабората натрия (12,367 г Н₃ВО₃ в 100 мл 1 н NaOH) до 100 мл 0,1 н раствором НСl);

4) Взвесь фосфорнокислой меди (готовят перед употреблением из упомянутых выше трех растворов: сначала смешивают растворы 1 и 2 в соотношении 1:2, а затем добавляют 2 (1+2) объема буфера).

Проведение анализа:

Для определения концентрации аминокислот в исследуемых растворах, строят калибровочный график по серии растворов с концентрациями 0.002, 0.004, 0.006, 0.008, 0.010, 0.015, 0.020 моль/л, которые готовят разбавлением исходного раствора аминокислоты с концентрацией 0.020 моль/л. В мерные или конические колбы на 50.0 мл вносят пипеткой 5 мл раствора аминокислоты с определенной концентрацией, прибавляют 5 мл медной фосфорнокислой взвеси (реактив 4) и встряхивают в течение 20 мин. Содержимое колб фильтруют через складчатые фильтры. Фильтрат фотометрируют против холостого раствора на приборе КФК-2. Для сравнения служит контрольный раствор, который готовят аналогично, приливая вместо раствора аминокислоты 5 мл дистиллированной воды и 5 мл медной фосфорнокислой взвеси. Определение оптической плотности стандартных растворов проводятся в интервале длин волн, включающем величину 670 нм. Для измерений используются кюветы с толщиной светопоглощающего слоя 1 см. По полученным значениям оптической плотности для серии растворов строят калибровочный график.

Методика потенциометрического определения рН.

Для измерения рН использовали метод прямой потенциометрии.

Приборы и оборудование: рН-метр «рН-150-МИ»

Проведение измерений:

Измерения проводят в стеклянном стакане, который предварительно обрабатывается. Перед измерениями электрод промывают дистиллированной водой и просушивают фильтровальной бумагой, после чего погружают в анализируемый раствор. Погрешность измерения ±0.01 ед. рН.

Результаты и обсуждение.