Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Количественное определение белка в моче по реакции с сульфосалициловой кислотой (нефелометрический метод)




Принцип метода

Белок при взаимодействии с сульфосалициловой кислотой подвергается денатурации. Раствор становится мутным. Степень мутности пропорциональна денатурации белка в растворе.

Реактивы

1. 3 % раствор сульфосалициловой кислоты.

2. 0,9 % раствор хлорида натрия.

3. 1 % стандартный раствор альбумина: 1 г лиофилизированного альбумина

растворяют в 0,9 % растворе хлорида натрия в мерной колбе на 100мл. Реактив стабилизируют добавлением 1 мл 5 % раствора азида натрия. При хранении в холодильнике раствор стабилен в течение 2 мес.

Ход определения

1) В пробирку отмеривают 1,25 мл профильтрованной мочи,

2) добавляют 3,75 мл раствора сульфосалициловой кислоты,

3) тщательно перемешивают.

4) Через 5 минут определяют оптическую плотность раствора на ФЭКе. Длина волны 590-650 нм (оранжевый или красный светофильтр), кювета с толщиной слоя 5 мм. Контролъ: 1,25 мл исследуемой мочи смешивают с 3,75 мл 0,9 % раствора NаС1.

5) Концентрацию белка в моче определяют по калибровочному графику. Построение калибровочного графика: готовят разведения стандартного раствора альбумина (табл. 2). Каждое из полученных разведений обрабатывают так же как опытную пробу.

 

 

Таблица 2. Приготовление разведений стандартного раствора альбумина

 

№ пробирки Стандартный р-р (мл) 0,9%NaCI (мл) Концентрация белка г/л
0,05 9,95 0,05
0,1 9,9 0,1
0,2 9,8 0,2
0,5 9,5 0,5
1,0 9,0 1,0

 

Прямолинейная зависимость величин оптической плотности и концентра­ции белка сохраняется до 1 г/л. При более высокой концентрации белка в пробе мочу следует развести и разведение учитывать при расчете.

Ложноположительные результаты могут быть получены при наличии в моче веществ, содержащих йод в случае приема йодсодержащих препаратов, использовании сульфаниламидных средств, больших доз пенициллина.

Биуретовый метод

Принцип метода

Белок при взаимодействии с сульфатом меди в щелочной среде образует комплексы фиолетового цвета. Интенсивность развивающейся окраски пропорциональна концентрации белка.

Реактивы

1.10% раствор ТХУ. 2. 20 % раствор Си5О4. 3.3% раствор NаОН.

Ход определения

1) К 5 мл мочи прибавляют 3 мл 10 % раствора ТХУ для осаждения белка.

2) Жидкость центрифугируют.

3) Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой.

4) К осадку белка добавляют 1 мл NаОН и 0,25 мл Си5О4,

5) Перемешивают и центрифугируют;

6) Надосадочную жидкость колориметрируют при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против дистиллированной воды.

7) Предварительно строят калибровочный график, с помощью которого определяют концентрацию белка в моче.

 







Дата добавления: 2015-08-17; просмотров: 4720. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!


Рекомендуемые страницы:


Studopedia.info - Студопедия - 2014-2021 год . (0.002 сек.) русская версия | украинская версия