ИЗ ТКАНЕЙ
ПРИНЦИП РАБОТЫ: Дезоксирибонуклеопротеиды растворяются в растворах солей средней концентрации (например, в 1М хлориде натрия) с образованием вязких растворов и снова осаждаются при разведении их (0,15М) в виде нитей нуклеопротеидов.
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ: 1) NaCl, 2М и 1М растворы, содержащие 0,04% трехзамещенного цитрата натрия (раствор хранят в холодильнике); 2) NaOH, 0,4 и 10% растворы; 3) дифениламиновый реактив, 1% раствор (1г дифениламина, дважды перекристаллизованного из 70% спирта или петролейного эфира, растворяют в смеси 2,75 мл концентрированной серной кислоты и 100 мл ледяной уксусной кислоты); 4) CuSO4, 1% раствор; 5) селезенка, печень.
ХОД РАБОТЫ: 1. В ступке, охлаждаемой льдом, растирают 2 г ткани органа, затем постепенно добавляют 5мл охлажденного 2М раствора хлорида натрия, содержащего 0,04% трехзамешенного цитрата натрия, и растирают в ступке еще в течение 15мин. 2. Затем, перемешивая содержимое, постепенно, малыми порциями добавляют 50 мл охлажденного 1М раствора хлорида натрия. Образовавшуюся гомогенную массу переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 15мин при 3000 об/мин. 3. Надосадочную жидкость после центрифугирования сливают в маленький стакан, измеряют в цилиндре объем полученного центрифугата и медленно вливают его в шестикратный объем дистиллированной воды тонкой струйкой, размешивая жидкость деревянной палочкой. Выделившиеся нити ДНП наматывают на деревянную палочку. Затем часть нитей ДНП осторожно собирают и вместе с палочкой переносят в другую пробирку. 4. Нити выделенного ДНП растворяют в 1 мл 0,4% раствора NaOH. Полученный раствор делят на две части и ставят: 1) биуретовую реакцию (на белок); 2) реакцию с дифениламином (на ДНК).
Биуретовая реакция на белковый компонент в ДНП К 5-10 каплям раствора ДНП добавляют 10 капель 10% раствора NaOH и по 1 капле1% раствора сульфата меди (II), Раствор окрашивается в сине-фиолетовый цвет.
|
