ГИДРОЛИЗ НУКЛЕОПРОТЕИДОВ

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Для изучения состава нуклеопротеидов проводят кислотный гидролиз дрожжей в присутствии серной кислоты. При непродолжительном, т.е. частичном, гидролизе нуклеопротеиды распадаются на белок и нуклеиновые кислоты. Про продолжительном гидролизе наступает полный распад нуклеопротеидов.

При гидролизе мононуклеотидов выделяются пуриновые или пиримидиновые основания, углевод (рибоза или дезоксирибоза) и фосфорная кислота.

Составные части нуклеопротеидов в гидролизате можно открыть с помощью цветных (качественных) реакций.

 

ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ: дрожжи (пекарские).

 

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) серная кислота, 10% раствор; 2) едкий натр, 10% раствор; 3) медь сернокислая, 1% раствор; 4) аммиак концентрированный; 5) азотнокислое серебро, 1-2% раствор (аммиачный раствор); 6) молибденовый реактив – раствор молибденовокислого аммония в азотной кислоте; 7) концентрированная серная кислота; 8) тимол, 1% алкогольный раствор; 9) круглодонная колба с воздушным холодильником; 10) воронка с фильтром; 11) мерный цилиндр на 50 или 100 мл.

 

ХОД РАБОТЫ:

I. Кислотный гидролиз нуклеопротеидов.

Помещают 1 г пекарских дрожжей в круглодонную колбу на 100 мл, добавляют 20 мл 10% раствора серной кислоты и 20 мл дистиллированной воды. Колбу закрывают пробкой с длинной стеклянной трубкой и кипятят под тягой в течение 1 часа на асбестовой сетке при слабом нагревании. Через час после начала кипения нагревание жидкости прекращают, дают ей остыть, переносят в цилиндр, доводят водой до первоначального объема и фильтруют.

С фильтратом проделывают качественные реакции на составные части нуклеопротеидов. При гидролизе нуклеиновых кислот обнаруживаются фосфорная кислота, рибоза или дезоксирибоза и азотистые основания – пуриновые и пиримидиновые.

 

II. Качественные реакции на составные части нуклеопротеидов.

а) Биуретовая проба на полипептиды.

К 5 каплям гидролизата прибавляют 10 капель 10% раствора едкого натра и 1 каплю1% раствора медного купороса. Жидкость окрашивается в розовый цвет.

 

б) Серебряная проба на пуриновые основания.

Нейтрализуют 10 капель гидролизата 1 каплей концентрированного аммиака и добавляют 5 капель 1% раствора азотнокислого серебра. При стоянии через 3-5 мин выпадает небольшой бурый осадок серебряных производных пуриновых оснований.

 

в) Качественная реакция Молиша на пентозную группировку.

При взаимодействии концентрированной серной кислоты с гексозами или пентозами происходит дегидратация их: из пентоз образуется фурфурол, а из гексоз – оксиметилфурфурол. Они дают с тимолом (метилизопропилфенол) или α-нафтолом в присутствии концентрированной серной кислоты продукты конденсации красного цвета.

 

К 10 каплям профильтрованного гидролизата дрожжей добавляют 2-3 капли 1% алкогольного раствора тимола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно приливают 20 капель концентрированной серной кислоты.

При встряхивании на дне пробирки образуется красное окрашивание вследствие образования продукта конденсации фурфурола с тимолом.

 

г) Молибденовая проба на фосфорную кислоту.

К 3-5 каплям гидролизата приливают 20 капель молибденового реактива (раствор молибденовокислого аммония в азотной кислоте) и кипятят несколько минут. Жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. При охлаждении образуется желтый кристаллический осадок комплексного соединения фосфорно-молибденовокислого аммония.

Молибденовая проба на фосфорную кислоту: H₃PO₄ + 12(NH₄)₂MoO₄ + 21HNO₃ →

→ (NH₄)₃PO₄ ∙ 12MoO₃ + 21NH₄NO₃ + 12H₂O

 

РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОДЫ:

 

 

Работа №2

 

ВЫДЕЛЕНИЕ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕОПРОТЕИДОВ (ДНП)