НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ В КРОВИ

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Интенсивность образования нуклеиновых кислот в организ­ме зависит от уровня белкового питания. Определение суммы нуклеиновых кислот - дезоксирибонуклеиновой и рибонуклеи­новой - дает возможность производить весьма точные серий­ные определения в небольших количествах крови (методики разработаны А.С. Спириным) с использованием спектрофотометрии при λ=270-290 нм (ультрафиолетовая часть спектра) после удаления белков при помощи соляной кислоты.

Спектрофотометрические измерения производят с помощью спектрофотометра СФ-26 или СФ-46.

 

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) кровь; 2) НСl, 0,6 н.; 3) пробирки обычные, мерные и центрифужные; 4) кипящая водяная баня (!); 4) центрифуга с холодильником; 5) СФ-46.

 

 

ХОД РАБОТЫ:

1. 0,1 мл крови размешивают в 1,4 мл воды.

2. К полученному гемолизату прибавляют 13,5 мл 0,6 н. раствора соляной кислоты (для этого лучше применять широкие центрифужные пробирки на 30-40 мл).

3. Пере­мешав смесь, пробирку помещают на 20 мин в кипящую водяную баню и закрывают маленькой воронкой. За это время происходит пол­ный гидролиз нуклеиновых кислот, связанных с белками, и осаждение всех белков.

4. Пробирку охлаждают, затем центрифугируют 10-15 мин при 1500 об/мин.

5. Надосадочную жидкость сливают в чистую пробирку и фотометрируют в кювете шириной 10 мм при λ= 270 и 290 нм против 0,6 н. раствора соляной кислоты.

6. Из среднего значения показателя, полученного при λ=270 нм, вычитают значение, полученное при λ=290 нм. Разность делят на эмпирический коэффициент 0,19 (согласно рекомендации А. С. Спирина). Получают количество фосфора в граммах (при разведении 0,1 мл крови в 150 раз).

7. Для нахождения фосфора в 100 мл крови надо увеличить полученное число в 100 раз. Чтобы вычислить содержание нуклеиновых кислот, количество фосфора умножается на коэффициент 10,3 (А.Н. Белозерский и Н.И. Проскуряков, 1951).

Т.о., подсчет нуклеиновых кислот ведут по формуле:

где

А - число, полученное при измерении раствора при λ=270 нм;

Б - число, полученное при измерении раствора при λ=290 нм.

 

РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОДЫ:

 

 

Работа №4