Студопедия — Метод FISH – флюоресцентная in situ гибридизация.
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Метод FISH – флюоресцентная in situ гибридизация.






Самая большая проблема получиь пластинки, в них находтся диски эухроматина и гетерохроматина. Тонкое исследование остаточно проблематично. Изотопный анализ в системе ч-б. получали метофазную пластинку на стекле ее денатурир и смеш с зондом смеш флюрисц меткой, зонд гибридизировался с комплиментарным участком. Метод мгновенно просочился в клиник. В интерфазном ядре хром сохран и могут гибридизов, то можно не выделть интерфазные пластинки. Можно использовать на интерфазном ядре.

Фиш модно использовать для выявление дупликации. Можно детектировать делеции. Наиболее частоиспользуемых зондов – зонд к гену р53 –активно используется для диагностики онкологических заболеваний. Если нет делеции – то заболев можно вылечить препаратами.

Можно выявлять транслокации. Берем 2 зонда и ели у нас 4 отдельных пятна своего цвета, то никаких нарушений генома в данном фрагм не произошло. Если 2 нормальных пятна, а оставшиеся 2 другие, они сливаются- следоватьельно зонды слились – есть транслокация. Зонд на транслокацию – самый активноиспользуемый. Этот зонд ипользовался для гематологического заболевания – онкология крови.

Хронический миелолейкоз – при лейкозах бластые клетки недотрансформированы. В хронич лейкозе кл не доконца дифференцированы и медленно делятся. Срок жизни 4-5 лет. При образовании филадельфийской хромосомы- железный милолейкоз. Филадейфийская хромосома образ из трансолокации 9 и 22 хромосомы. Образ химер транскриптон химерной транскриптон тирозиновой киназы.

Был создан зодн к промотору и тирозин киназе. Если зонды располож на разных участках – здоров. Если слияние, диагноз поставлен.

ПЦР.

1 статья в 1986г. Было известно, что существуют спец затравки – они отожгутся на комплиментарные цепи ДНК. С ориджин связыва только ДНК-полимераза 3, 1-ая ДНк полимераза. ДНКполим 1 не содержа нуклазной активностью – фрагмент кленова – использ для зашивки брешей в ДНК, для синтеза, меченья фрагментов. Синтезируют на встречу – д2 фрагмента кленова. Далее денатурируем. И каждый следующий цикла. Циклическое повторение – денатурация 94С, затравка-матрица, достройка.

Пробема- оптимум температуры 37С у фрагмента кленова, после каждого этапа денатурации и отжига необходимо докапывать ДНК полимеразу. Основная пресс=лесть – использование таг – полимеразы из термус акватику – бактерия обитающая при 94С. Оптимум еевункционирвания 72 градуса, этот фермент в состоянии пережить темпер 94 градуса.

Условия ПЦР.

1. Матрица

2. Буфер, соли

3. Магний

4. Неионный детергент тритон 100

5. Смесь дезоксинуклеотидов

6. Затравки – праймеры – синтезируют в специальных фирмах. Концентрация праймеров 10пико моль на концентрацию, до 5 микомоль, редко 15-20 пикомоль. Можно синтезировать праймеры с помощью ПЦР (20-25 н).если меньше температура отжига ниже и отжигается со сходными (гомологичными) – специф ПЦР резко падает. Хотя в реакциях требуется получение набора полос –исп меньшие температуры. Меньше вероятность образования 2-ой цепью с соседним участком.

7. Taq – полимераза 1,25-2,5 единиц (до 10 единиц на реакцию)

На специфичность влияет правильный подбор праймеров. Необходимо проверить ГС состав. На 3 конце должна быть СС, ГГ. в праймере больше ГС – выше темпер отжига- выше специфичность и никаких блоков из 3-4 одинаковых букв- снижают специфичность.

Концентрация Mg влияет на специфичность – реакция иначе не пойдет, если его нет. Повышая концентрацию-повышаем специфичность.

Стандартный предел концентрации Mg от 1,5-3,5.

3 – температура отжига- это цикл ПЦР. 1 цикл – 1-5 мин на 94С. 2 цикл – амплификация м.б. одноэтапная, 2-х этапная.

1-этапная – наблюдается от 20-40 циклов. 30-35 самые частые циклы. Каждый цикл состоит из 3-х этапов. 1-денатурация от 30 сек-1 мин. Отжиг. Темпер зависит от темпер отжига праймеров. Разница в 1-2 градуса несмерт. От 30-1мин.3 –дотройка 70С –отптимум полимеразы. Зависит от длины амплифиц фрагмента за 50 сек – синтез 1 килобаза (1 тпн).

Иногда, когда высокая температруа отжига используется 2-х тактнй ПЦР, отжиг и достройка при одной температуре, объединяют. Для ГС богаых праймеров.

Двух этапный ПЦР на 1 этапе – накопительные циклы – характерно длямалого количества матри ДНК.5-10 циклов идет наработка с низкой специфичностью.

Достройка – необязат 70С, 5-10мин.

 

ПЦР используется для амплификации фрагментов. Просочился в клиническую практику.

ПЦР-ПДРФ

АК замена- это результат нуклеотидной замены. У ДНК есть сайты рестрикции. Если 1 нуклеотид и не входит в его состав сайта рестрикции и появляются сайты рестрикции. У одного не разрезается. У гомозиготного режутся все 3 фрагмента. Выявляют группу риска – рак легких. Сайт рестрикции может не возникнуть, а может исчезнуть. При мутации не режется.

VNTR- ПЦР – фариабельность количества повторов.

У бактерий сущетв тандемные повторы и когда идет репликация, тое уменьшится или увел кол-во тандемн повторов. Берем праймеры к фланкир областям и амплифиц фрагмент содерж повтор. Тот у кого повторов 4, длина фрагм 4Х.

ОТ-ПЦР – используется 1 прймер, используются субстраты, спец буфер, ревертаза синтезирует молекулы ДНК. РНК-аза Н. к 3 штрих концу –реперс праймер.

Выявляют вирусы получают дНк копии. Тжик в центре молекулы Днк. Медо для определения 3 – 3 штрих рейс. Для 5-аналогично. Используют адаптер и полиТпраймер. Получается к ДНК и ставится ПЦР – ставится с прямого праймера или праймера из двух частей. Получаем полАхвост. Полиаденелирование-расщепление матричных ДНК. Некоторые ДНК полиурегинирируются.

 

ПолиАполимераза может присоединять любые нуклеотиды.

Рибосомные РНК не имеют модификации на конце, что хар-но для большинства РНК.

5-RACE

Доводим до 5, кДНК обрабатывают, можифицируют, на 3 насаживают необходимые нуклеотиды. И образуется полиС-фрагмент. Димеры праймеры образуются, а не ДНК, которую необходимо отделить. Выделяем из геля то, что нас интересует, выделяем и ставим на ПЦР. Есть набор специальный набор отделения кДнк.

Метод определения нуклеотидной последовательность по Сенгеру.

Идет нарастание цепей, наращиваем только 1 цепь. Берем 1 праймер. Необходимо ограничить эти цепи. Использовались дидезоксинуклеотиды. Восстановлены оба гидроксила. Можно взять 4 типа дидезоксинуклеотида. Замешиваем ПЦР с 1 меченым рпаймером. Разделяем на 4 части. В 1 дидезокси А,В,С,Д. обчыно ДДОН чтобы соотношение было 10\1 – но у каждой фирмы сове соотношение. В результате будет набор амплифиц форагменто, оргвнис праймером, с другой гуанином. И наносим на гель GACT. И читаем последовательность. Использ специфческий гель – толщ 0,2 мм. Это позволяет разделять фрагменты, различающиеся на 1 нуклеотид.

Можно разогнать на стеклах – до 50 см. до 40 читабельно. С 1 автографа можно прочитать от 30-80(100).

Автоматизация пришла с внесением флюорисцент метки, вносимая в дидезоксинуклеотид. Аденин светися зеленым, гуанин фиолетовым, тимин-красным, цитозин-синий. Метод очень удобный. Получить заведомо до 600нуклеотидов.

 

-определение функций различных структур генома.

Позволяющие какие транс –элементы взаимодействют с цис элементами ()

 

Схема определения промоторов в митох кинетопластид.

1-консервативная, 2 –вариабельная (большое кол-во повторов)

2 праймера, присоед к возможно промотору, клонировала его в плазмиду, взяла праймер к промотеру, а 2 праймер в плазмиде. Амплифицировала весь промотре и участок плазмидной ДНК. Участок плазм ДНК- маркерный ген – транформирован в митохондрию. Синтезировали РНк и выделиле суммарную РНК. Поставили суммарную транскрипцию к бактериальной плазмиде.

РНк- будет давать обратнуб транскирипцию, след образовался ПЦР продукт, значит в исследуемом районе есть промотор. 12 нуклеотидов идентифицировали. Выбирая все меньше и меньше размер конс области.

 

Гетеро хроматизация. Исследуемая кострук вводит с пом-ю р эл-ов. Если произошло исчезновения функции, значит работает.

Группа методов, которые определяет тран-элементы: фут принт: меод задержки в геле и метод собственно фут принта.

Методом задержки получают комплекс исследуемой ДНк, метят его и смешивают с белком, часть ДНК оразует комплекс с белком. Наносим смесь на гель, так которая с белком движется медленнее. Свободная ДНК убегает значительно дальше. Комплекс ДНК белок сшивается – уф излучение. Обрабатываем нуклеазой, где произошша сшивка разрезать невозмонжо. Наносим на фарез. Наносят фрагмен, в которм определяют последовательность ГАТС.

 

Метод микрофарез – нанесение на гель в малых количествах и идентиф в малых количествах.

Опрееление через гибридизацию. Наосится на поверхность какой-то структуры набор различных зондов и в ним присоеденияется меченая молекула ДНК, но она связанная с гасителем. Когда происходит взаимод гаситеьл теряет связь с меткой и метка начинает светится. На 1 планшете можно определить большое кол-ко что где отжигается.

Идетификация белков – мпетод чипов.

Позволяет сренировать больие объемы за достаточно быстрое время.

 

 

Структура геномов прокариот.

Геном прокариот делится на хромосомный и нехромосомный. Основной геном хромосомный, образован хромосомой или нуклеоидом.

Бектериальная хромосома неограниченна мембраной, прикреплена к цитоплазматической мембране клетки. Всегда кольцевая и содержит основной набор генетической инормации для функционирования клетки. Длина генома 8*10в6 пн. Чем более бактерия самостоятельна тем длиннее ее геном. Геном паразитических бактерий короче, чем бактерий, которые ведут паразиический и сапрофитный образ жизни. У бактерий экстрималов значительно длиннее. ГС состав тоже достаточно сильно варьирует в предела 30-40 %. Между дальнородственными видами – как таксономич признак. Хромосомная ДНК содержит 1 точку репликации транскрип. Счит, что бактер кл гаплоидна. ДНК упорядочена, связана с белками. Саму структуру геном можно пдразделить на 2 части – кодирующая и некодир. Кодир ДНК составляет до 95%, в кодир ДНК входят открытые рамки считывания - от старт до стоп кодона, часть которая транслируется. В случае транспортных и рибосомных рнк – функцион часть от 1 до 2. Гены не перекрваются. Геном прокариот не имеет перекрываний и компактность не выходит далко. Некодирующей ДНК относится все остальное – но это функциональные элементы – ориджинрепликации. Состоит из не-ких инвертируемых и тандемных повторов. Очень АТ богатая, связываются белки инициации репликации. Регуляторный элементы транскрипции – открытая рамка считывания входит в состав транскриптон – промотор, регуляторн элементы, открыт рамка счит(несколько, которые кодируют белки одного метаболитического пути - оперон), терминатор. Оперонная организация генома. К регуляторным элементам транс – операт пром, регул термин.

Структура промотора – у эукариот четкая струткура не выявляется. Длина 80поснований. 1 точка инициации А/Г, 2 участка, распознающ ДНК –полимеразой. -10 домен прибного ТАТААТ от 5-9 пн, домен -35 ТТГАСА – высокий уровеньблока ТТГ. Расстояние между -9-36 16-19 п.н.

Сила промотера – частота инициации, частота перехода в открытый или закрытый комплекс. Самым сильным промтоер- консенсусный. Любое отклонению по структуре идет к ослаблению промотера. Для риб и транс сильные промотеры РНК. Регуляция процесса основана на наличии сильных и слабых промоторах.

Регуляция лактозного оперона.

2 элемент необходимый при регуляции инициации – оператор.

 

Регуляция с сигмой-субьединицей (определяет связвание, обеспечивает правильное узнавание). Мажорная сигма-субьединица (70) и если присутсвует данная субъединица то процесс будет осуществляться. Минорные сигмасубъединицы. Если данная субъединица экпрессируется, ее экспрессия регул индивид, то она может связаться с коровой частью РНК полимеразы, значит и связывается с соответсвующим промотором. Это характерно для беков теплового шока, и белки отвеч за споруляцию бацилл.

 

Регуляция а счет аттеньюаторов (регулируемые репрессоры) – характерен для прокариот, т.к. у них транскрипция и трансляция не разграничены во времени и пространстве. Перео опероном расположена регуляторная область, левее распол промотор. Апстрим ближе к 5, даунстрим ближе к 3.

 

РНК состоит из повторов. 1-2 образую шпильку, шп 3-4 ро-независимый терминатор. Шпилька 2-3 –не терминаторная. Лидерный пептид способствует образования терминаторных шпилек. Если мало триптофана то рибосома застрянет в критической области образ шпилька 2-3 и рибосома не застревает, а идет дальше.

 

Некодирующие ДНК 15%.

К нефункциональной части: спейсеры –межгенные промежутки (транскриб-внутри оперона и нестраскри –м\х оперонами) –частота мутации в спейсерах очень велика. К нефункц относятся: мобильные генетические элементы (IS-элементы и транспасозны) и вирусы. IS –корокая конструкция окруж инвентирован повторами – это сегменты ДНК, спсобные как целое перемещаться из одного участка в другой, 1 ген - транспозаза. Более сложные транспозоны - это IS элемент+ген, которой может принести пользу клетке (устойчивость к антибиотикам). Транспосозны отлич по типу транспозиции – консервативные и полуконсервативные.

Повторы могут встреч у эукариот в составе кодирющей – внося изменения, и некодир части. Повторы м.б. организованы в кластеры или структуры.

Вриабельные участки повторов. VNTR – повторы могут располаг внутри белков и так же внекодирующей части. Повторы очень часто используются мобильные гентич элементы для перемещения.

Наличие повторов увеличивает частоту мутации.

 

Нехромосомные элементы генома.

Могут перемещ в хромосому. Плазмиды, фаги и мигрурующие элементы.

Плазмиды – самореплец кольцевая молекула 1,5-40кбаз. Содержат ориджин репликации, соответсвующиц ориджину ьактерий. Наличие доп гена, который обеспечивает преимущество, автономная структура. Бактерии могут принимать плазмиду и выкидывать ее.

Существет несколько видов плазмид R – устойчив в А, Col – способные синтезир колицины, F – передают генетич информацию, Шу – синтез гомолизин, Tox – синтез токсины.

МОбильн генетич элементы -могут перемещаться. Фаги – действиют по литическому пути (быстро нарабатывается вирусная частица – разрыв кл –гибель кл), умеренные фаги – могут идти 2 путями: лизогенный высвоб из капсида, фаг встраив в геном и наслед-ся вместе с хозяиновм.; в результате мутации может вызвать гибель клетки.

Трансформация открыта в 1928г, принятие чистой ДНК, чистой плазмиды. Клека должна быть восприимчивой к трансформации.

Трасдукция – передача через бактериаофаги. 2-х типов: специфическая (если переносится 1 ген), неспецифическия. Коньюгация – непосредственный обмен.

 

Структура генома эукариот.

Геном отличаются от прокариот:

· Появление ядра – более сложная организация гент инф, разделение проц транскрип и трансл во времени

·. Увелич числа хромосом – со своим наобром информации. Появление Ядерного генома.

· Геном органелл – митохондрий и у раст –хлоропластов.

Структура генома хлоропластов. Консервативная часть.

Хлоропл геномпредствален 20-40 копиями отдной кольцевой молекулы. Вес 0,8-1,3 *10в8. Геном содер кодир и некодир часть. Некодир часть компактна, кодир часть рпедставл 120 непрерывн рамками считывания. Гены 4-х рибос РНК – хлоропл. 20 хром генов – белки АТФ синтазы, фотосистемы, 40 не известны. Ориждин 1. Существует несколько промоторов. Геном хлоропласта в подчинении ядерного генома. Хлоропласт бостаточно самостоятелен. Расположение генов в хлоропл докзало что их предками являя цианобактерии.

 

Геном митохондрий.

Произошли от рикеттсиоподобные бактерии, наиболее полны геном характерен баткерии рода реклиномонас. Мб. Как линейной так и кольцевой. Обе цепикодирующие для большинства организмов характерна высокая компактность генома и зависит от таксона. Выделяют 4 гр мит генома: жив, растений, грибов, простейших.

МИтхегом жив – короткая кольцеваямолекула 15-20 тыспарнукл. Четко выдел 2 части, кодирующая часть в которой плотно, перекрваясь располож 37 генов некодир – регуляторная область лил Д –петля, варьирует по длине. В ней расположены ориджин репликации, промоторы и репликаторы. Расположение генов может варьировать, добавляться некодирующие области.

Растения. Значтальено крупнее от 180-кбаз -2,5 тыс Кбаз. Набор генов сходен с набором генов жив. У растений исчезает компатная регуляторная область. Промотеры расположены по всему геному. Гены растений не перекрываются. Разделены спейсерами и могут содержват ьв себе интроны.

Грибы Длина сравнива с животными. Оомицеты(самый примитивный), низшие грибы, аскомицеты, базидиомицеты.

низшие –хитридиомицеты геном 57 кбаз, исчезает компактная регуляторная область, появля межгенные промеж до 800пн. У низших грибов появлвяются не. Аскомицеты геном мальенький, но при этом спейсеры очень длинные с промоторами, терминаторные области. Гены грибов содержат интроны 2-х типов. Интроны автосплайсинга и интроны 2 типа, которы частично экспрессируют. Высшие грибы сходны по сруктуре генома с другими грибами, происходит увеличиние генома и появляются дополнительные рамки считывания.

Мит геном простейших. Мугут быть кольцевыми и линейные – инфузория. Мол вес от 6 кбаз, до 76 тпн. Отностя геном подобный жив\гриб. Есть геномы сод – геном обла, спейсер, но промоторы распред в кодир части. В митох стр-а промотора различается, схема транскрипции различается.

2 базовые схемы транскр: позвоночных; растений и грибов.

Пунктаци теория у пзвон гены считываются по полицитрон цепи с противоположной цепитак же идет синтез единого полицистрона. Сигналом для процессинга явлчяются тРНК, котрые явл-ся «запятыми».

У раст и грибовпромоторв несколько. Считвание короткх полицистр рнк и моноцистронных рнк.

Помими базовых структур измен и промоторные.

У ляг – 2 дубл промотра, короткиею перекрваютс. У птиц влияние 2-х и обрах крестовая структура. У жив. Апстрим – регуляторный элемент. Промотор очень короткий со строгой проследовталньостьб.

У грибов ()дрожжей и нейроспоар изуч хорошо) у грибов апстрим элементы - обле посадку и инициацию, разл по длине.

Растений-3 базовых типа промотроа: промот водорослей, пром однодольных и двудольных. Однодольные – длинный, ТАТА бокс, аналог -35 элемента. У двудольн -достат длинный блок, 2 болока анлоги: ТАТА бокса и -35 бокса.

 

Струткура ядерного геном прокариато. Распол в ядре, произ несколькими хромосомами. Умэукариот больш кл диплоидные. Из-за слодности в организации и большого обема геном мб находится в состоянии-гетерохроматин, эухроматин и в состоянии митотических хромасом. Нуклеосома – оптомер из 8 гистоновых белков связь междуними обеспеч гистон Н1.

3*10в9 пн.

Соотношение кодир и некод области. У бактерий кодир 85%, у челов кодир часть 15%. Открытые рамки считывания входят в состав транскриптона. Организация транскриптонов начинает варьировать.

1 вид транскрипт- гены рибос РНК, кассета генов рибос РНК – ядрышковый организатор. Количесвто повтор копий от 100-1000. Каждая такая копия-целая единица, след транскриб полицистронная РНК.

Гены кодир белки: не распространена оперонная организация. Гены могут рапрстр наразных хром. Мозаичнаяструктура хром, интроны кодир, экзоны некодир.

рРНК и тРНК –интроновмне содержит. Длина интронов варьирует. Внутри интрона рамка считываения. Некоторые гены кластерные. гены теплового шока образ кластеры.

Некодир ДНК эукариот ориджин и репликация – значит сложнее. На 1мхром нес-ко сацтовинин репликации.

Сущ 3 типа элементов иниц транскрипции, т.к. 3 типа РНК. Нексколько паррмоторов раздел повторами сдесь е и терминаторные бобласти. Рнкполимер2 взаимоде с промторной областью, значит более крпна присусвует ТАТА боки с аналог -35 с ними связываются факторыинициации транскрипции. Регулят элемента 2 типа-апстрим регул сайт-хорошо выраж у дрожжей. Аналогичные участки металлозависимые.

 

Некодирующая часть генома – считается, что это свалка – придает массу геному. Никакой нагрузки не несет. «Свалка генома»/темная сторона генома.

Относятся: псеводегены, повторы, мобильные генетические элементы (МГЭ).

Молекулярный фингер-принт – отпечатки пальцев- используется для определения отцовства – по количеству повторов в хромосоме.

3 основные типа повторов:

· уникальные- в штучном количестве- это кодирующая часть генома

· промежуточные/среднечастотные повторы – это обычно МГЭ и псевдогены.

· Высокочастотные – это сами повторы+часть МГЭ, число в геноме до 10в6.

 

Псевдогены – нетранскрибируемы открытые рамки считывания. Результат транскрипции матричных РНК, по краям есть повторы, обеспечивающие встройку в геном. Не транскрибируются сами по себе, не содержат регуляторов транскрипции, но источник генетического разнообразия.

Частота мутаций высока: чревато. У дрозофил такое явление значительно реже. У простейших ПГ – запчасть генома, есть даже в митохондриальном геноме.

 

Высокочастотные повторы – сателитная ДНК, теломеры, центромены. Сателлиты – минорный компонент ДНК, отделяющийся от основной ДНК при равномерном ультрацентрифугированийй в граденте плотности.

Выделяют 2 основных распрееделния: дрозофилы и ксенопуса.

У ксенопусов – коротки уникальные части 50% генома и между ними тондемные повторы, по 20% редкое встраивание, и 10% -короткие повторы.

У дрозофилы 90% -одинаковый геном, длинные повторяющиеся повторы, уникальные последователньости между ними более 15 тпн.

У позвоночных распределение генома может быть 2 пердстваленных видов. Сателитная ДНК дрозофилы – образована различными повторами и оп распределению сателитной ДНК можно определить вид.

 

Сателитная ДНК по последовательности (для дорозоффилы): существует 11 семейств, 4 из них преобладаю - мажорные., 7 минорных. Часть хромосомоспецифична. Разные рамеры 6 пнк до 359 пн. Обычно сДНК накапливает мутации, но не очень быстро, но в некотрых случаях происходит изменение скорости накопления мутаций (определяются с помощью молекулярных часов).

МГЭ- селятся в сДНК.

Общее свойства:

1. Быстрая точная реассоциация, т.к. много гомологичных последовательностей

2. Простая первичная структура

3. Множество копий

4. Гомогенный состав

5. Пурин-пиримидиновая ассимитрия в распределении нуклеотидов по цепям ДНК

6. Концентрация в прицентромерном гетерохроматине

7. Ограниценная репликация при политенизации хромосом

8. Нахождение в хромосоме в ваиде тандемнорасположенных кластеров.

Содержание сДНК от 5-50%.

У позвоносных выделили 2 гр: микро(1-4тпн) и мини сателлиты. Есть еще небольшие посторы, которые образуют группу повторов с изменяющимся числом копий. Повторы с изменяющимся числом копий – VNTR.

Если критическая масса перевалена – синдром хрупкости хромосомы.

Эпигенетика – столнулись, когда начали изучать клоны.

сДНК- участвует в гетерохроматизации. Гетерохроматик транскрипц неактивная часть клетки. сДНК гетерохроматиз сама и вовлекает рядом кодирующие части.

Эффект положения – который приводит к мозаичному эффекту – разные глаза

 

Метилирование ДНК.

Происходит по метил-цитозину – входит в ЦГ островки и метелирование провоцирует гетерохроматизацию само по себе, в промоторной области происходит отключение. Метелирование- ГЦ мотив и триплет ЦНГ. Метилирование осуществляют – метилтрансферазы. Коферментом -донором является S-аденозин метионин. Склонность в метилированию отличается – у животных варьирует, у некоторых беспозвононых неметилируется, у растений может метилироваться любой цитозин, а не только входящий в опредленную группировку. У грибов – свободна от метилирвоания. Основнай масса низших эукариот –не имеет механизмов регуляции с помощью метилирования.

У эукариот метилтрансфераза около 100кДа. Метилирование напрямую выключает или стимулирует гетерохроматизацию.

Функции:

· Блокирование транскрипционного шума

· Блок транспазонов (МГЭ)

· Может блокировать кроссинговер

 

Центромера – образована повторами, некодирующая. Обнаружены при цитигенетич исследований. Перетяжка, к которой крепятся нитиверетена деления,образ кинетохор, обеспецч чивает респределение хромосом.

Центромера дрожжей сахарамицес церевизие: точечные центромеры – 125 пн: состав CDE1,2,3 – к ним препится микротрубочка. В СДЕ3 происходит прикрепление. У других дрож центромера увеличивается и образованы они сДНК.

У млекопитающих – увеличение размера центромеры, идут повторяющие элементы, альфа-сателит из 171 пн, образуя в итоге несколько млн пн. У растений центромеры могут варьировать в зависимости от хромасомы – 3 блока. Прецентромеры и центральная часть.

 

Теломеры – некодирующая часть, обнаружены цитогенетиками- концевые части хромосомы. 1932г изучают повдеение теломер. Искучтвенные конциы хромосом объединяются только с такими же искутвенно бобразвоавшимися, концевые уч-ки никогда рекомбинируют, их размер с каждым делением уменьшается.

Размер-соотв количеству делений, которые они переживут. Уменьшение происхдит из-за недорепликации концевой цепи.

Теломера состоит: повтор – теломерные повторы – участок ассоц с теломерой.

Теломерные повторы 3-4 Т/ТА и 3-4Г/С. У некоторых организмов теломеры имеют другую структуру – повторяющиеся МГЭ.

У раковых клеток происходит искусственное удлинение теломер, за счет фермента теломеразы (РНК и белок)- присоедин в недореплицир участку имея совою собственную затравку – в виде РНК.

 

Теломеры:

1.крепятся к ядерной оболочке

2. теломерные участки двух хромосом ассоциируются

3. могут взаимодействовать с гетерохроматином

Теломерные районы окрашиваются при дифферен окраске хромосом

Недореплицируются в политемных хромосомах.

Гены, располож в прителомерных участках всегда реактивируются. В результате модификации – наблюд эффект положенит.

 

Функции:

· Защита о недреплик

· Организация ДНК внутри ядра

· Доноры для репаративной рекомбинации

 

Диспергированные поторы – МГЭ и их производные, открыты в 40-х. могут премещ по геному, встраив рядом влияют на активность гена, меняют мутагенность регионов в которые встраиваются. Сами являются причиной мутагенеза.

Активирующий элемент и неавтономные элементы – состав.

МГЭ -2 типов: 1 класс- ретротранспазоны –производные ретровирусов, сод LTR элементы –перемещение в другой ген – гиперактивация или замолкание, обратная транскриптаза, GAG-белок. И 2 класс транспозоны – перемещ черехз ДНК=овую фазу.

 

У растений аналогично, но есть автономные элементы и неавтономные – перемещ при налиции автономных, которые активируют перемещение. 2 осн класса:Sine -90-400 п.о. Line

Сайн – Alu – повторы –есть 10в6 повторов. Сайн один из признаков генома млекопит.

Лайн- производны МГЭ на основе ретротранспазонов, но у них исчезают LTP-ры. L1 – 2 рамки счит, на мышах, лтр утеряны.

 

 







Дата добавления: 2015-08-12; просмотров: 713. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Расчетные и графические задания Равновесный объем - это объем, определяемый равенством спроса и предложения...

Кардиналистский и ординалистский подходы Кардиналистский (количественный подход) к анализу полезности основан на представлении о возможности измерения различных благ в условных единицах полезности...

Обзор компонентов Multisim Компоненты – это основа любой схемы, это все элементы, из которых она состоит. Multisim оперирует с двумя категориями...

Композиция из абстрактных геометрических фигур Данная композиция состоит из линий, штриховки, абстрактных геометрических форм...

Устройство рабочих органов мясорубки Независимо от марки мясорубки и её технических характеристик, все они имеют принципиально одинаковые устройства...

Ведение учета результатов боевой подготовки в роте и во взводе Содержание журнала учета боевой подготовки во взводе. Учет результатов боевой подготовки - есть отражение количественных и качественных показателей выполнения планов подготовки соединений...

Сравнительно-исторический метод в языкознании сравнительно-исторический метод в языкознании является одним из основных и представляет собой совокупность приёмов...

Понятие о синдроме нарушения бронхиальной проходимости и его клинические проявления Синдром нарушения бронхиальной проходимости (бронхообструктивный синдром) – это патологическое состояние...

Опухоли яичников в детском и подростковом возрасте Опухоли яичников занимают первое место в структуре опухолей половой системы у девочек и встречаются в возрасте 10 – 16 лет и в период полового созревания...

Способы тактических действий при проведении специальных операций Специальные операции проводятся с применением следующих основных тактических способов действий: охрана...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.01 сек.) русская версия | украинская версия