Мобильные генетические элементы эукариот.

Подвижные генетические элементы эукариот составляют около 10-30 % генома. Они способны перемещаться внутри хромосомы и между хромосомами.

Транспозоны.. Эти элементы ограничены инвертированными повторами. Р-элемент дрозофилы и Ас-элемент кукурузы представлены в геномах в 30-50 копиях, содержат ген транспозазы – белок, ответственный за транспозицию.

Р-элемент обычно встраивается в определенный сайт с канонической последовательностью: ГГЦЦАГАС. При встраивании транспозона сайт мишень дуплицируется. Встраивание транспозона внутрь гена приводит к инактивации гена. Вырезание транспозона из гена приведет к восстановлению гена.

Перемещение транспозона. Возникшая брешь может быть залечена с помощью гомологичного участка ДНК, например, с использованием только, что синтезированной цепи ДНК. Осуществляется комплементарное взаимодействие нитей в гомологичных участках ДНК, затем происходит достройка – синтез комплементарных нитей.

Ретротранспозоны с длинными концевыми повторами (ДКП). В теле ретротранспозона обнаружены открытые рамки считывания обратной транстриптазы и интегразы. ДКП обеспечивают начало и конец транскрипции, а также репликацию. Внедрение ретротранспозона внутрь гена может его инактивировать. Внедрение ретротранспозона рядом с геном может усилить экспрессию гена за счет энхансера в составе ДКП. Внедрение ретротранспозона рядом с геном может усилить экспрессию гена за счет сильного промотора в составе ДКП. Ретротранспозоны с ДКП способны залечивать двухцепочечные разрывы ДНК.

Ретротранспозоны без ДКП. В перемещении ретротранс-позона без ДКП участвуют ревертаза и интеграза.

Ретропозоны. Ретропозоны – внедрившиеся в геном ДНК-копии, синтезированные на различных РНК. Ретропозоны ограничены короткими прямыми повторами. Некоторые ретропозоны являются псевдогенами,. Рамки трансляции таких псевдогенов часто испорчены, они могут не иметь своего промотора. Если ретропозон правильно процессирован, ДНК-копия содержит правильную рамку считывания, то возможно его экспрессия (ретроген).

 

40. Определение нуклеотидной последовательности ДНК

Фаг Т7 - 40 000 п.н.

E.coli - 4 000 000 п.н.

Человек - 3 000 000 000 п.н.

В одном эксперименте можно определить последовательность ДНК до 500 п.н. Хорошо оснащенная лаборатория может в течение дня определить последовательность ДНК из нескольких миллионов п.н.