Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Метод Сангера и Коулсона (энзиматический метод)





В его основе лежит принцип копирования анализируемой цепи ДНК с помощью ДНК полимеразы. Если врастущую цепь ДНК включается дидезоксинуклеотид, то синтез ДНК обрывается, потому что в 3’-положении отсутствует гидроксильная группа. Если включается дезоксинуклеотид в растущую цепь ДНК, то синтез ДНК может быть продолжен

Образец ДНК разделяют на четыре порции

Во все порции добавляют:

-ДНК-полимеразу

-дНТФ (дАТФ, дТТФ, дЦТФ, дГТФ)

-затравку – олигонуклеотид, комплементарный анализируемой цепи ДНК

В первую порцию добавляют ддАТФ, во вторую – ддТТФ, в третью – ддЦТФ, в четвертую – ддТТФ

1 проба:

-ДНК- полимераза будет включать в растущую цепь нуклеотиды в соответствии с принципом комплементарности

-Напротив Т она может включить либо дАМФ, либо ддАМФ. Процесс включение является вероятностным

-Если в растущую цепь ДНК включится ддАМФ, то синтез ДНК оборвется, если в растущую цепь ДНК включится дАМФ, то синтез ДНК будет продолжен.

С помощью электрофореза определяют длину фрагментов ДНК. Если длина фрагментов ДНК равна 13, 18 и 23 нуклеотидам, следовательно в 13, 18 и 23

положении фрагмента будет находится А, а в анализируемой цепи Т. Аналогично определяют положение других нуклеотидов в анализируемой цепи ДНК.

 

43. Полимеразная цепная реакция

Суть - многократное копированиеопределенного участка ДНК. В течение нескольких часов с помощью ПЦР из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 50 млрд. идентичных молекул.

Стадии ПЦР-анализа

1. Подготовка пробы

2. Амплификация

3. Детекция посредством электрофореза в агарозном геле

Компоненты реакционной смеси ПЦР

-Праймеры – искусственно синтезированные олигонуклеотиды (15-30 п.н.) идентичные концевым участкам ДНК-мишени, способные с ними образовывать гибриды

-Tag-полимераза – термостабильная ДНК-полимераза

дНТФ

-Анализируемый образец

Режим эксперимента

1. Денатурация – реакционную смесь нагревают до 92-95 оС, в результате двухцепочечная ДНК расплетается

2. Отжиг – праймеры присоединяются к одноцепочечным ДНК

3. Элонгация – Tag-полимераза обеспечивает синтез второй цепи ДНК

Цикл повторяется 30-35 раз







Дата добавления: 2015-08-12; просмотров: 694. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!




Композиция из абстрактных геометрических фигур Данная композиция состоит из линий, штриховки, абстрактных геометрических форм...


Важнейшие способы обработки и анализа рядов динамики Не во всех случаях эмпирические данные рядов динамики позволяют определить тенденцию изменения явления во времени...


ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ МЕХАНИКА Статика является частью теоретической механики, изучающей условия, при ко­торых тело находится под действием заданной системы сил...


Теория усилителей. Схема Основная масса современных аналоговых и аналого-цифровых электронных устройств выполняется на специализированных микросхемах...

Случайной величины Плотностью распределения вероятностей непрерывной случайной величины Х называют функцию f(x) – первую производную от функции распределения F(x): Понятие плотность распределения вероятностей случайной величины Х для дискретной величины неприменима...

Схема рефлекторной дуги условного слюноотделительного рефлекса При неоднократном сочетании действия предупреждающего сигнала и безусловного пищевого раздражителя формируются...

Уравнение волны. Уравнение плоской гармонической волны. Волновое уравнение. Уравнение сферической волны Уравнением упругой волны называют функцию , которая определяет смещение любой частицы среды с координатами относительно своего положения равновесия в произвольный момент времени t...

Виды и жанры театрализованных представлений   Проживание бронируется и оплачивается слушателями самостоятельно...

Что происходит при встрече с близнецовым пламенем   Если встреча с родственной душой может произойти достаточно спокойно – то встреча с близнецовым пламенем всегда подобна вспышке...

Реостаты и резисторы силовой цепи. Реостаты и резисторы силовой цепи. Резисторы и реостаты предназначены для ограничения тока в электрических цепях. В зависимости от назначения различают пусковые...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2025 год . (0.01 сек.) русская версия | украинская версия