Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Метод Сангера и Коулсона (энзиматический метод)





В его основе лежит принцип копирования анализируемой цепи ДНК с помощью ДНК полимеразы. Если врастущую цепь ДНК включается дидезоксинуклеотид, то синтез ДНК обрывается, потому что в 3’-положении отсутствует гидроксильная группа. Если включается дезоксинуклеотид в растущую цепь ДНК, то синтез ДНК может быть продолжен

Образец ДНК разделяют на четыре порции

Во все порции добавляют:

-ДНК-полимеразу

-дНТФ (дАТФ, дТТФ, дЦТФ, дГТФ)

-затравку – олигонуклеотид, комплементарный анализируемой цепи ДНК

В первую порцию добавляют ддАТФ, во вторую – ддТТФ, в третью – ддЦТФ, в четвертую – ддТТФ

1 проба:

-ДНК- полимераза будет включать в растущую цепь нуклеотиды в соответствии с принципом комплементарности

-Напротив Т она может включить либо дАМФ, либо ддАМФ. Процесс включение является вероятностным

-Если в растущую цепь ДНК включится ддАМФ, то синтез ДНК оборвется, если в растущую цепь ДНК включится дАМФ, то синтез ДНК будет продолжен.

С помощью электрофореза определяют длину фрагментов ДНК. Если длина фрагментов ДНК равна 13, 18 и 23 нуклеотидам, следовательно в 13, 18 и 23

положении фрагмента будет находится А, а в анализируемой цепи Т. Аналогично определяют положение других нуклеотидов в анализируемой цепи ДНК.

 

43. Полимеразная цепная реакция

Суть - многократное копированиеопределенного участка ДНК. В течение нескольких часов с помощью ПЦР из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 50 млрд. идентичных молекул.

Стадии ПЦР-анализа

1. Подготовка пробы

2. Амплификация

3. Детекция посредством электрофореза в агарозном геле

Компоненты реакционной смеси ПЦР

-Праймеры – искусственно синтезированные олигонуклеотиды (15-30 п.н.) идентичные концевым участкам ДНК-мишени, способные с ними образовывать гибриды

-Tag-полимераза – термостабильная ДНК-полимераза

дНТФ

-Анализируемый образец

Режим эксперимента

1. Денатурация – реакционную смесь нагревают до 92-95 оС, в результате двухцепочечная ДНК расплетается

2. Отжиг – праймеры присоединяются к одноцепочечным ДНК

3. Элонгация – Tag-полимераза обеспечивает синтез второй цепи ДНК

Цикл повторяется 30-35 раз







Дата добавления: 2015-08-12; просмотров: 694. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!




Важнейшие способы обработки и анализа рядов динамики Не во всех случаях эмпирические данные рядов динамики позволяют определить тенденцию изменения явления во времени...


ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ МЕХАНИКА Статика является частью теоретической механики, изучающей условия, при ко­торых тело находится под действием заданной системы сил...


Теория усилителей. Схема Основная масса современных аналоговых и аналого-цифровых электронных устройств выполняется на специализированных микросхемах...


Логические цифровые микросхемы Более сложные элементы цифровой схемотехники (триггеры, мультиплексоры, декодеры и т.д.) не имеют...

СПИД: морально-этические проблемы Среди тысяч заболеваний совершенно особое, даже исключительное, место занимает ВИЧ-инфекция...

Понятие массовых мероприятий, их виды Под массовыми мероприятиями следует понимать совокупность действий или явлений социальной жизни с участием большого количества граждан...

Тактика действий нарядов полиции по предупреждению и пресечению правонарушений при проведении массовых мероприятий К особенностям проведения массовых мероприятий и факторам, влияющим на охрану общественного порядка и обеспечение общественной безопасности, можно отнести значительное количество субъектов, принимающих участие в их подготовке и проведении...

СИНТАКСИЧЕСКАЯ РАБОТА В СИСТЕМЕ РАЗВИТИЯ РЕЧИ УЧАЩИХСЯ В языке различаются уровни — уровень слова (лексический), уровень словосочетания и предложения (синтаксический) и уровень Словосочетание в этом смысле может рассматриваться как переходное звено от лексического уровня к синтаксическому...

Плейотропное действие генов. Примеры. Плейотропное действие генов - это зависимость нескольких признаков от одного гена, то есть множественное действие одного гена...

Методика обучения письму и письменной речи на иностранном языке в средней школе. Различают письмо и письменную речь. Письмо – объект овладения графической и орфографической системами иностранного языка для фиксации языкового и речевого материала...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2025 год . (0.01 сек.) русская версия | украинская версия