Цель работы: овладеть колориметрическим методом определения хлорофилла в листьях растений.

Количество хлорофилла в листьях растений подвергается значительным колебаниям, которые определяются внутренними особенностями (вид растения, возраст органа) и условиями внешней среды (интенсивность света, температура, минеральное питание и др.). Содержание зеленых пигментов и его динамика в растениях существенно влияют на интенсивность фотосинтеза и продуктивность организма. Поэтому в эксперименте часто ставят задачу учета количества хлорофилла, для чего применяют колориметры и спектрофотометры различных систем.

Ход работы: работа состоит из двух этапов: 1) получение спиртового экстракта пигментов; 2) определение его концентрации. Для приготовления раствора хлорофилла используют свежие листья растений. Величина навески зависит от количества хлорофилла в листе. При работе с интенсивно зелеными листьями достаточно 0,25–0,50 г; слабоокрашенных тканей брать в пробу 1 г и более. Навеску поместить в фарфоровую ступку и растереть пестиком до однородной массы. Для лучшего измельчения тканей необходимо перед растиранием к навеске добавить немного кварцевого песка или битого стекла. Чтобы не произошло феофитинизации хлорофилла за счет эндогенных кислот, для нейтрализации последних добавить щепотку мела.

К растертой массе прилить небольшое количество этанола, снова тщательно растереть. Содержимое ступки количественно перенести на воронку с фильтром. Использовать фильтр с белой лентой. Его размер подбирать так, чтобы края фильтра не были выше краев воронки. Особое внимание обратить на аккуратное перенесение зеленой массы на фильтр. Эту операцию надо осуществлять без потерь, соблюдая следующие правила:

носик ступки с внешней стороны смазать тонким слоем вазелина;

переносить жидкость по стеклянной палочке;

ступку при сливании жидкости наклонять резко, а значит, порция спирта не должна приливаться больше той, что вместится в воронку за один прием.

Ступку и пестик ополаскивать небольшими порциями спирта и переносить его на фильтр до тех пор, пока не останется следов зеленых пигментов на ступке, пестике и фильтре. Фильтрат собрать в мерную колбу на 25–50 мл, после полного извлечения пигментов довести этанолом до метки, тщательно перемешать и использовать для количественного определения хлорофилла с помощью фотоэлектроколориметра (ФЭК) или спектрофотометра.