Опыт 7. Определение пигментов растений колориметрическим методом

Общие принципы экстракции пигментов

Пигменты могут быть экстрагированы из свежего и фиксированного материала. При выборе экстрагирующих веществ необходимо учитывать растворимость пигментов и возможность их выделения данным растворителем из пигментно-липопротеидного комплекса, в виде которого пигменты находятся в пластидах.

В зависимости от химического строения различают растворители полярные (спирты, ацетон) и неполярные (петролейный эфир, гексан, бензин и др.). Степень полярности растворителя определяется величиной его дипольного момента.

Хлорофиллы и каротиноиды, являясь в основном липофильными соединениями, хорошо растворяются во всех растворяющих липиды соединениях: ацетоне, спирте, эфире, бензине, петролейном эфире и т.д.

Однако полное извлечение пигментов из растительного материала достигается только при использовании полярных растворителей или смесью полярных и неполярных растворителей. Полярные растворители, вызывая денатурацию белка и нарушая связи пигментов с липопротеидным комплексом, обеспечивают быструю экстракцию всех пигментов. Для выделения пигментов чаще всего используют 80%-ный ацетон или 90%-ный спирт.

Экстракцию проводят возможно быстрее. Пигменты экстрагируют последовательно несколькими порциями чистого растворителя, отделяя каждый раз раствор пигментов центрифугированием. При растирании навески листьев с растворителем необходимо добавлять небольшое количество СаСО₃, МgСО₃ или 1 н раствор NН₄ОН для предотвращения разрушения пигментов.

Вся подготовительная работа с пигментами ведется в затемненном помещении, на холоду. В ацетоновой вытяжке определяются количественно хлорофилл А, В и каротиноиды спектрофотометрическим способом.