Белки слюны
В слюне белка содержится от 1,5 до 4,0 г/л. Методом двумерного электрофореза определено присутствие в слюне около 500 различных пятен, характеризующих различные белки и полипептиды. Из них только 120-150 являются секреторными, т.е. попадают из больших и малых слюнных желез, а остальные имеют бактериальное и клеточное (из форменных элементов и лейкоцитов) происхождение. Таблица 4.2
Слюнные белки способны объединяться как между собой, так и с неорганическими компонентами, создавая тем самым определенную внутреннюю среду ротовой полости. Они смогут выполнять одну или несколько функций, что свидетельствует об их полифункциональности. Некоторые слюнные белки охарактеризованы (табл.4.2), у них определен аминокислотный состав, биологическая значимость. Гликопротеины слюны. Характеризуя белки слюны, без преувеличения можно сказать, что большинство их является гликопротеинами, в которых количество углеводов достигает 4-40%. Секреты различных слюнных желез содержат гликопротеины в различных пропорциях, что и определяет разницу в их вязкости. Так, наиболее вязкая слюна - секрет подъязычной железы (коэффициент вязкости - 13,4), затем подчелюстной (3,4) и паротидной (1,5). Синтез гликопротеинов слюны протекает в несколько стадий. Вначале синтезируется белковое ядро, к которому затем присоединяются углеводные цепи. В условиях стимуляции могут синтезироваться неполноценные гликопротеины и слюна становится менее вязкой. Слюнные гликопротеины неоднородны. Макромолекулярные гликопротеины.(МГП) Для этих белков характерна высокая степень гидратированности. Присоединение и связывание воды МГП определяется: 1) большими размерами белковой молекулы; 2) зарядом радикалов внутримолекулярных аминокислот; 3) присутствием полярных углеводных цепей. Белковая часть МГП содержит большое количество остатков серина, треонина, пролина и аланина. Олигосахаридные цепи связываются с гидроксильной группой серина и треонина О-гликозидной связью. МГП совместно с анионными гликопротеинами обеспечивают вязкость слюны, которая осуществляет защиту слизистой оболочки полости рта от механических, температурных, химических и бактериальных воздействий. Они увлажняют и обволакивают пищевой комок, что облегчает его прохождение в глотку и пищевод. Среди МГП наиболее исследованы группоспецифические вещества и муцин. Группоспецифические вещества. В 1900 году Ландштейнер описал группы крови АВО. На сегодняшний день известно более 20 систем групп крови, экспрессирующих более 160 различных антигенов. В наибольшей степени изучены группы крови АВН(О) и система Льюиса. Вещества, обладающие антигенной специфичностью А, В и определяющие группу крови, прочно связаны в эритроцитах со специфическими мембранными белками О-гликозидными связями и не могут быть извлечены из их стромы ни водой ни солевыми растворами. Специфические олигосахариды, образующие данные антигены присутствуют в трех формах: 1) в виде сфинголипидов и гликопротеинов на поверхности эритроцитов; 2) в виде олигосахаридов в молоке и моче; 3) в виде олигосахаридов, связанных с муцинами, секретируемыми в желудочно-кишечном, мочеполовом и дыхательном трактах. Слюнные группоспецифические вещества в отличие от эритроцитарных гликолипидов содержат до 85% углеводов и 15% белка. Антигенная специфичность группоспецифических веществ определяется строением некоторых остатков сахаров, разложенных на концах углеводных цепей. Так, цепь антигена A заканчивается остатком N-ацетилгалактозамина, а цепь антигена В остатком галактозы. Во всем остальном обе цепи одинаковы. Следует отметить, что между галактозой и остатком N-ацетилгалактозамина может иметься β-1,3 – связь (цепи типа 1) или β-1,4-связь (цепи типа 2) и такие цепи могут обладать как А- так и В-специфичностью. Цепи с Н-специфичностью отличаются от цепей А и В лишь тем, что в них отсутствуют терминальные остатки N-ацетилгалактозамина и галактозы. Встречаются индивидуумы, у которых гликопротеины, содержащиеся в секретах, лишены характерной специфичности А, в или Н. Людей можно разделить по этому признаку на две четко разграниченные группы. У представителей одной из них, так называемых "секретеров", слюна и другие секреты обладают специфичностью А, В и Н, тогда как у представителей второй группы ("не - секреторы") эта специфичность отсутствует. Около 80% европейцев являются "секреторами" и около 20% -"не - секреторами". Секреторный статус данного индивидуума постоянен и детерминирован генетически. На биосинтез и, следовательно, также на антигенную специфичность водорастворимых гликопротеинов, влияет еще один генный локус - локус Lewis (Lе). Секреты или эритроциты, обладающие Lе - специфичностью, обозначают Lе(а+), а те, которые ею не обладают, Lе(а-). Известно, что Lе-активность в секретах значительно более выражена у "не - секреторов", чем у "секреторов". Концентрация группоспецифических веществ в слюне равна 10-130 мг/л. Они, в основном, поступают с секретом малых слюнных желез и точно соответствуют группе крови, исследование группоспецифических веществ в слюне используется в судебной медицине для установления группы крови в тех случаях, когда это невозможно сделать иначе. Муцин слюны. Вязкость слюны прямо связана с муцином. Муцины также входят в состав секретов бронхов и кишечника, семенной жидкости и выделений шейки матки. Все они играют роль смазки и, кроме того, защищают подлежащие ткани от повреждений, как механических, так и химических. В полипептидной цепи муцина из подчелюстной слюнной железы содержится большое количество серина и треонина, их насчитывается около 200 на одну полипептидную цепь. Третьей, наиболее часто встречающейся аминокислотой, в муцине является пролин и поэтому гликозилированные участки им очень богаты. К остаткам серина и треонина через О-гликозидную связь присоединены остатки N-ацетилнейраминовой кислоты, N-ацетилгалактозамина, фукозы и галактозы. Сам белок напоминает по своему строению гребенку: короткие углеводные цепи, как зубья, торчат из жесткой, богатой пролином полипептидной основы. Эти подобные гребенке структуры с помощью дисульфидных мостиков между белковыми глобулами и создают большие молекулы протеина с особыми вязкими свойствами.
Анионные гликопротеины(АГП). Из секрета поднижнечелюстных слюнных желез был выделен кислый белок, содержащий большое количество остатков серина (18 сер на 100 амк) и 600-800 дисахаридных цепей. Терминальное положение в олигосахаридных цепях АГП представлено остатками N-ацетилнейраминовой кислоты. Высокое содержание N-ацетилнейраминовой кислоты в АГП обеспечивает защиту тканей полости рта от вирусной инфекции. Известно, что патогенные вирусы выделяют нейраминидазу и с ее помощью фиксируются на мембране клеток хозяина. Остатки N-ацетилнейраминовой кислоты в АГП выполняют роль рецепторов для связывания нейраминидазы вирусов. Вирусы, контактируя с АГП, теряют свою вирулентность и со слюной попадают в пищеварительный тракт, где расщепляются пищеварительными ферментами. Катионные гликопротеины.(КГП) КГП были выделены из секрета околоушных желез. Они составляют 25% общего белка и 75% всех углеводов, присутствующих в паротидной слюне. КГП содержат большое количество остатков лизина, аргинина и гистидина и поэтому при физиологических значениях рН заряжены положительно. Кроме того, в этих белках определяется высокое содержание пролина (74 на 100 амк), глицина (46 остатков на 100 амк), глутамина (46 на 100 амк) и аспарагина. Углеводная часть КГП представлена остатками N-ацетилгалактозамина, L-фукозы и галактозы. Углеводные цепи к белку присоединены через N-гликозидную связь. После секреции слюнными железами КГП адсорбируются на поверхности эмали зуба и формируют основную часть зубной пелликулы. Адсорбция КГП на зубных поверхностях осуществляется путем взаимодействия положительно заряженных радикалов аминокислот с отрицательно заряженными фосфатами гидроксиаппатитов минерализованных тканей зуба. Начало адсорбции КГП на поверхности эмали сопровождается изменением конформации КГП с последующим переходом в плохо растворимую форму. Это связано с тем, что осевшие бактерии выделяют гликозидазы, которые и расщепляют цепи КГП. Фосфосодержащие гликопротеины (ФГП). Содержат до 1% ортофосфата, который присоединяется к остаткам серина, треонина или к аминогруппе аргинина. Фосфаты защищают пептидные связи в ФГП от гидролиза и обеспечивают высокое сродство ФГП к ионам кальция кристаллической решетки гидроксиаппатитов. Они вместе с КГП формируют приобретенную пелликулу зуба. Лактоферрин – гликопротеин, содержащийся во многих секретах. Особенно его много в молозиве и слюне. Он связывает Fe3+бактерий и нарушает окислительно-восстановительные реакции в бактериальных клетках, оказывая тем самым бактериостатическое действие. Иммуноглобулины слюны. В слюне присутствуют все 5 классов иммуноглобулинов-IgA, IgAs, IgG, IgM, IgE. Как известно, все иммуноглобулины различаются по молекулярной массе, конфигурации, углеводному компоненту, и состоят из 2-х типов полипептидных цепей - Н (тяжелая цепь) и L (легкая цепь). Иммуноглобулины A можно разделить на 2 подкласса, а иммуноглобулины G на четыре. Иммуноглобулин A1 содержится, преимущественно, в плазме крови и соответствует типу строения, который описывается 4-х цепочечной моделью, как димер. Секреторный иммуноглобулин А (IgAs, IgA2) образуется плазматическими клетками, находящимися в анатомической связи с эпителием слизистых оболочек и ацинарных клеток слюнных желез. Синтезированный в плазматических клетках димер IgА, состоит из 2Н, 2L и J цепей затем покидает их и связывается с секреторным компонентом IgAs(СК, SР). Секреторный компонент (гликопротеин с м.м. 80 кДа) образуется в слюнных железах и располагается на плазматической мембране ацинарных клеток в качестве рецептора. Образовавшийся комплекс димер АgА-SР путем пиноцитоза перемещается к апикальной части клетки и поступает в слюнные протоки. Околоушные слюнные железы поставляют 90% IgAs, а поднижнечелюстные только 10% IgAs. Секреторный компонент IgAs защищает молекулу антитела от разрушения ферментами различных клеток, а также повышает ее устойчивость к воздействию денатурирующих факторов. IgAs по своей активности превосходит все другие иммуноглобулины. Свое антибактериальное действие он оказывает не связываясь с комплементом. Считается, что комплемент заменяется на лизоцим. Цельная слюна у взрослых содержит от 30 до 160 мкг/мл IgAs, все другие иммуноглобулины определяются в количестве меньшим, чем 1 мкг/мл, поскольку они поступают из плазмы крови путем простой транссудации через малые слюнные железы и зубо-десневую бороздку. Следовательно, IgЕ, IgG, IgМ имеют двойное происхождение. Дефицит IgAs встречается в одном случае на 500 человек и сопровождается частыми вирусными инфекциями. В секретах слюнных желез обнаружено несколько специфических слюнных белков, характеризующихся преобладанием одной или нескольких аминокислот. К ним относятся белки богатые пролином, белки богатые тирозином, белки богатые гистидином и цистатины. Белки богатые пролином (РR Р). Впервые об этих белках в 1971 году сообщил Оппенхеймер. Они были открыты в паротидной слюне и составляют до 70% от общего количества всех белков в этом секрете. Молекулярная масса РRР колеблется от 6 до 12 кДа. Исследование аминокислотного состава выявило, что 75% от общего числа аминокислот приходится на про, гли, глу, асп. Это семейство белков представлено несколькими белками, которые можно разделить по их свойствам на 3 группы: 1) кислые PRP; 2) основные PRP; 3) гликозилированные PRP. Белки богатые пролином выполняют в полости рта несколько функций. В первую очередь они легко адсорбируются на поверхности эмали и являются компонентами приобретенной пелликулы зуба. Кислые PRP, входящие в состав пелликулы зуба, задерживая деминерализацию зуба и ингибируя излишнее осаждение минералов, поддерживают постоянство кальция и фосфора в эмали зуба. Кроме того, кислые и гликозилированные PRP способны связывать определенные микроорганизмы и тем самым участвуют в образовании микробных колоний бляшки. Гликозилированные PRP также необходимы для смачивания пищевого комка. Роль основных PRP пока до конца неясна. Однако, предполагается, что они играют определенную роль в связывании танинов пищи и тем самым защищают слизистую оболочку полости рта от их повреждающего действия, а также придают вязко-эластические свойства слюне. Белки богатые гистидином (гистатины HRP ). Из секретов околоушных и подчелюстных слюнных желез человека выделено семейство основных полипептидов, отличающихся большим содержанием гистидина. Эта группа включает 12 полипептидов. Исследование первичной структуры гистатинов показало, что они состоят из 7-38 аминокислотных остатков и имеют большую степень сходства между собой. Гистатины 1 и 2 значительно отличаются от других членов этого семейства белков. Считается, что гистатин 2 является фрагментом гистатина 1, а гистатины 4-12 образуются при гидролизе гистатина 3 при участии ряда протеиназ, в частности, калликреина. Предполагается, что образование гистатинов путем ограниченного протеолиза происходит либо в секреторных везикулах, либо при прохождении белков через железистые протоки. Хотя биологические функции гистатинов окончательно не выяснены, уже установлено, что гистатин 1 участвует в образовании приобретенной пелликулы зуба и является мощным ингибитором роста кристаллов гидроксиапатитов в слюне. Смесь очищенных гистатинов подавляет рост некоторых видов Str.mutans. Гистатин 5 вовлечен в процесс подавления слюной вируса иммунодефицита и грибков (Candida albicans). Считается, что одним из механизмов такого антимикробного и антивирусного действия является взаимодействие гистатина 5 с различными протеиназами, выделенными из микроорганизмов ротовой полости. Статерины. Statherin (белки богатые тирозином). Из секрета околоушной слюнной железы выделен фосфопротеин, состоящий из 43 аминокислот. Он вместе с другими секреторными белками ингибирует спонтанную преципитацию фосфорнокальциевых солей на поверхности зуба, в ротовой полости и в слюнных железах. Цистатины. В 1984 году две группы японских исследователей независимо друг от друга сообщили о присутствии в слюне еще одной группы секреторных белков - цистатинов. Цистатины синтезируются в серозных клетках околоушных и подчелюстных слюнных желез. Всего обнаружено 8 слюнных цистатинов. Цистатины - кислые белки с молекулярной массой 9,5-13 кДа. Они ингибируют активность цистеиновых протеиназ. К цистеиновым протеиназам относятся катепсины В, Н, L и другие протеиназы, у которых в активном центре присутствует остаток аминокислоты цистеина. Помимо ингибирующей активности цистатин SA-III содержит 4 остатка фосфосерина и возможно он вовлекается в связывание фосфорнокальциевых соединений с эмалью зуба, и часть цистатинов определена в приобретенной пелликуле зуба. Высокая степень присоединения SAI, SAIII вероятно связана с тем, что цистатины имеют сходство в аминокислотной последовательности с другими адгезивными белками - фибронектином и ламинином. Сходный участок включает около 100 аминокислотных остатков и находится в ламинине вблизи участка связывания с клетками. Считается, что через ингибирование активности цистеиновых протеиназ слюнные цистатины выполняют антимикробную и антивирусную функции. Они также защищают белки слюны от энзиматического расщепления, поскольку секреторные белки могут функционировать только в интактном состоянии. Альбумин. В смешанной слюне этот белок определяется в небольшом количестве. В слюну альбумин попадает из плазмы крови с десневой жидкостью, а также вместе с RPR в секрете околоушных слюнных желез. Количество альбумина в слюне может меняться при стоматитах и ряде других заболеваний, например, хроническом панкреатите. Ферменты слюны. В смешанной слюне определяется активность более 100 ферментов (табл. 4.3), различных по происхождению и выполнению биологических функций. Гликозидазы. В слюне определяется активность эндо- и экзогликозидаз. К эндогликозидазам в первую очередь относится α-амилаза слюны и лизоцим. α-Амилаза. Слюнная α-амилаза расщепляет 1—4 гликозидные связи в крахмале и гликогене. По своим иммунохимическим свойствам и аминокислотному составу слюнная α-амилаза очень сходна с панкреатической амилазой. У обеих амилаз определяется 94% сходства в аминокислотной последовательности. Определенные различия между этими амилазами обусловлены тем, что слюнная и панкреатическая амилазы кодируются различными генами (АМУ1 и АМУ2). α-Амилаза выделяется с секретом паротидной железы, где концентрация ее составляет 648-803 мкг/мл и не зависит от возраста, но меняется в течение суток и зависит от чистки зубов и приема пищи. Таблица 4.3
Лизоцим. Гидролизует гликозидную связь между С-1 N-ацетилмурамовой кислотой (NАМ) и С-4 N-ацетилглюкозамина (NАС), которые формируют полисахарид муреин клеточной стенки бактерий. Фермент представляет собой одну полипептидную цепь из 129 аминокислотных остатков и массой 14,6 кДа. Стабильность фермента обеспечивают четыре поперечных дисульфидных мостика. Лизоцим определяется не только в слюне, но и в десневой жидкости, слезах, курином белке, и является компонентом неспецифической антибактериальной защиты. Активность этого фермента в ротовой полости может уменьшаться при тяжелых формах пародонтита. Другие гпикозидазы. В смешанной слюне определяется активность еще нескольких гликозидаз, это α-L-фукозидазы, α и β-гликозидаз -, α и β-галактозидаз, α-D-маннозидаза, β-глюкуронидазы, β-гиалуронидазы, β-N-ацетилгексозаминидазы, нейраминидазы. Все они имеют различное происхождение и разные свойства. Если α-L-фукозидаза выделяется с секретом околоушной железы и расщепляет (α 1→2 связи) в коротких олигосахаридных цепях, то β-N-D-ацетилгексозаминидаза содержится как в смешанной слюне, так и в секретах больших слюнных желез, и образуется смешанной культурой микрофлоры полости рта. α и β-Глюкозидазы, α и β-галактозидазы, β-глюкуронидаза, нейраминидаза и гиалуронидаза имеют бактериальное происхождение и наиболее активны в кислой среде. β-D-гиалуронидаза катализирует гидролиз β 1,4 связей в гиалуроновой кислоте, хондроитинсульфате и дерматансульфате. Изменение гиалуронидазной активности в слюне и десневой жидкости коррелирует с повышением числа Гр+ бактерий и возрастает при воспалении десны. Вместе с гиалуронидазной активностью возрастает активность β-глюкуронидазы, которая в норме подавляется ингибитором β-глюкуронидазы, поступающего из плазмы крови. Хотя активность кислых гликозидаз в слюне невелика, все же было показано, что слюнные гликозидазы расщепляют белково-гликозидные группы в слюнных муцинах. Во время инкубации слюны при 37°С из слюнных муцинов быстро образуются сиаловые кислоты и аминосахара. Пероксидаза. Слюнная пероксидаза (СПО) катализирует окисление тиоцианатов (SCN-) путем расщепления H2O2 образованием -ОSСN (гипотиоцианат) и НOSСN, которые оказывают антимикробное действие. В цельной смешанной слюне определяется две разных группы СПО, имеющих ИЭТ в кислой и щелочной средах. Фермент с ИЭТ в щелочной среде образуется в околоушной и подчелюстной слюнных железах и представлен множественными формами с м.м. 78; 80 и 28 кДа. Это гликопротеин, т.к. содержит до 4,6% углеводов. Поскольку СПО содержит гем, она также относится к гемопротеинам. Бактерии зубной бляшки, мелкие слюнные железы и эпителиальная выстилка лишены этого фермента. В процессе очистки и выделения СПО было обнаружено, что фермент находится в комплексе с одним из белков богатых пролином. Образование этого комплекса неясно. Изучение кинетик равновесного состояния окисления тиоцианата (SСN-), катализируемого СПО позволиловыяснить, что, механизм окисления SСN- включает несколько реакций. Окисление начинается с рН независимого окисления фермента Н2О2 с последующим образованием соединения I, которое затем протонируется и вызывает окисление SСN-. Эта реакция также независима от значения рН. Однако, второе протонирование соединения I порождает образование неактивного продукта. Наибольшее окисление SСN- СПО протекает при рН = 5-6. Это имеет определенное значение, поскольку кинетические свойства СПО показывают, что ее антибактериальный эффект увеличивается при кислых значениях рН. Известно, что Str.mutans наиболее чувствителен к ингибированию гипотиоцианатом при рН < 7,0, что позволяет говорить о том, что таким способом включается пероксидазная система слюны и ее антибактериальные свойства при кислых значениях рН увеличиваются до предела. Это формирует в свою очередь опасность деминерализации твердых тканей зубов хозяина. Образовавшийся гипотиоционат оказывает в 10 раз более мощное антибактериальное действие, чем Н2О2. При спонтанном распаде Н2О2 образуются реакционные формы О2, гидроксидный радикал, супероксидный анионрадикал. O2-; ОН-; OSCN- совместно воздействуют на ненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК), белки и нуклеиновые кислоты, что приводит к образованию продуктов свободно радикального окисления, нарушению структур клеток и их гибели. Таким образом, биологическая роль СПО в полости рта заключается в том, что с одной стороны продукты окисления тиоцианатов ингибируют рост и метаболизм лактобацилл и некоторых других микроорганизмов, а с другой стороны предотвращают аккумуляцию H2O2многими видами стрептококков полости рта, а также клетками хозяина. Интересно, что антимикробная активность СПО модулируется углеводными компонентами смешанной слюны. Глюкозамины и сахароза стимулируют образование Н2О2. Протеиназы слюны. В слюне определяется невысокая активность протеиназ, рН оптимум которых находятся в кислой и слабощелочной среде. Низкая их активность в норме связана с присутствием в слюне ингибиторов протеиназ белковой природы. Из слабощелочных трипсиноподобных протеиназ в слюне наиболее активен калликреин. Кислые протеиназы представлены катепсинами D и В, активность которых увеличивается при гингивитах и пародонтитах. Ингибиторы протеиназ. В смешанной слюне человека определяется активность α1-ингибитора протеиназ (α1-ПИ), α2-макроглобулина (α2-М), цистатинов и низкомолекулярных кислотостабильных ингибиторов трипсиноподобных протеиназ (КСИ). α1-ИП поступают в ротовую полость из сыворотки крови и определяется только в одной трети исследуемых образцов слюны. Это одноцепочечный белок, состоящий из 294 амк, синтезируется в печени а виде предшественника. α1-ИП ингибирует эластазу, коллагеназу, плазмин, калликреин, микробные сериновые протеиназы. α2-макроглобулин - поливалентный ингибитор протеиназ. Это гликопротеин с м.м. 725 кДа, состоящий из 4-х субъединиц. Синтезируется в печени и поступает из сыворотки крови в слюну у 10% обследуемых. В последние годы выполнены исследования, раскрывающие механизм взаимодействия α2-М с протеиназами. На первом этапе активная протеиназа (П) реагирует с определенным участком молекулы α2-М. При этом образуется непрочный комплекс α2-М-П. На втором этапе фермент расщепляет специфическую пептидную связь (приманку), что приводит к конформационным изменениям молекулы белка (α2-М). На третьем этапе протеиназа ковалентно присоединяется к особому участку в молекуле α2-М, что сопровождается образованием более компактной структуры. В слюнных железах человека и животных содержатся ингибиторы типа семейства Кунитца и другие кислотостабильные ингибиторы протеиназ. Это низкомолекулярные белки с м.м. от 6,5 до 10 кДа, они ингибируют калликреин, трипсин, эластазу, катепсин G. В смешанной слюне часть этих ингибиторов находятся в комплексе с протеиназами (около 15%), а другая часть в свободном состоянии. Слюнные железы животных используют для получения ингибиторов протеиназ как лекарственных препаратов. Они выпускаются фирмами под названиями "трасалол", "контрикал", "гордокс" и др. Из подчелюстных слюнных желез кошки выделен двуглавый ингибитор протеиназ, который имеет 2 центра связывания с ферментами. Один центр связывал трипсин, а второй химотрипсин. Вполне возможно, что часть ингибиторов трипсиноподобных протеиназ в смешанную слюну поступает не только из слюнных желез и плазмы крови, но из лейкоцитов, десны и микроорганизмов. Щелочная и кислая фосфатазы. Кислая фосфатаза (рНopt= 4,8) отщепляет неорганический фосфат от органических соединений. Фермент в смешанную слюну попадает с секретами больших слюнных желез, а также из бактерий, лейкоцитов и эпителиальных клеток. В слюне определяется до 4 изоферментов кислой фосфатазы. Кислая фосфатаза слюны по своим свойствам близка к ферменту из простаты, но не из плазмы крови. Активность фермента в слюне, как правило, увеличивается при пародонтите, гингивите. Имеется противоречивые сведения об изменении активности этого фермента при кариесе зубов. Щелочная фосфатаза (рНopt= 9,1-10,5). Активность фермента очень низка в секретах слюнных желез и ее происхождение в слюне связывают с клеточными элементами.Активность этого фермента, как и кислой фосфатазы, может увеличиваться при воспалении мягких тканей полости рта, кариесе. Однако, полученные данные очень противоречивы и не всегда укладываются в какую-то определенную схему. Вместе с тем, выявлено, что повышенная растворимость эмали при использовании реминерализующей терапии совпадает с высокой активностью слюнной щелочной фосфатазы. Низкомолекулярные органические вещества ротовой жидкости. Липиды. Общее количество липидов в слюне невелико. Оно непостоянно и считается, что большая их часть поступает с секретом околоушной и подчелюстной желез и только около 2% из плазмы и клеток. Так, количество общих липидов в нестимулированном секрете околоушной железы не превышает 60-70 мг/л. Часть слюнных липидов представлена свободными длинноцепочечными насыщенными и полиненасыщенными жирными кислотами - пальмитиновой, стеариновой, эйкозопентаеновой (С20:5) олеиновой (C18:1) и др. Кроме жирных кислот в слюне определяются свободный холестерин и его эфиры (около 28% от общего количества), триацилглицеролы (около 40-50%) и в очень небольшом количестве глицерофосфолипиды. Следует отметить, что данные о содержании и характере липидов в слюне неоднозначны. Это связано в первую очередь с методами очистки и выделения липидов, а также способом получения слюны, возрастом доноров и др. факторами. Мочевина. Мочевина в полость рта поступает с секретами слюнных желез. Наибольшее ее количество выделяется малыми слюнными железами (28,0 ммоль/л), затем околоушными слюнными железами (25 ммоль/л) и подчелюстными слюнными железами (10,0 ммоль/л). Количество выделяемой мочевины зависит от скорости слюноотделения и обратно пропорционально количеству выделенной слюны. Известно, что уровень мочевины в слюне повышается при почечных заболеваниях. Мочевина в полости рта расщепляется при участии уреолитических бактерий осадка слюны. Освобождающееся количество аммиака влияет на рН зубной бляшки и смешанной слюны (способствует подщелачиванию). Помимо мочевины в слюне определяется мочевая кислота. Содержание ее в слюне (до 0,18 ммоль/л) отражает концентрацию в сыворотке крови. В слюне также присутствует креатинин в количестве 2-3 мкмоль/л. Все эти вещества определяют уровень остаточного азота в слюне. Слюна содержит лактат, пируват и другие органические кислоты, нитраты и нитриты. В осадке слюны в 2-4 раза больше содержится лактата, чем в жидкой ее части, в то время как пируват определяется больше в надосадочной жидкости. Увеличение содержания органических кислот, в частности, лактата в слюне, и зубном налете способствует очаговой деминерализации эмали и развитию кариеса. С пищей, табачным дымом, водой в слюну поступают нитраты (NО3-) и нитриты (NO2-). Нитраты при участии нитратредуктазы бактерий превращаются в нитриты. Содержание нитритов зависит от курения. Показано, что при лейкоплазии слизистой оболочки полости рта у курильщиков и лиц занятых в табачном производстве в слюне растет количество нитритов и активность нитратредуктазы. Образовавшиеся нитриты в свою очередь могут вступить в реакцию со вторичными аминами (аминокислоты, лекарства) с образованием канцерогенных нитрозосоединений. Эта реакция протекает в кислой среде, а ускоряют ее добавленные в реакцию тиоцианаты. Углеводы. Углеводы в слюне находятся, преимущественно, в связанном состоянии с белками. Свободные углеводы появляются после гидролиза полисахаридов и гликопротеинов ферментами бактерий слюны и α-амилазой. Однако, образовавшиеся моносахара (глюкоза, галактоза, манноза, гексозамины) и сиаловые кислоты быстро утилизируются микробами ротовой полости и превращаются в органические кислоты. Часть глюкозы может также поступать с секретами слюнных желез и отражать концентрацию глюкозы в плазме крови. Поэтому, при тяжелых формах сахарного диабета количество глюкозы в паротидной слюне возрастает параллельно с увеличением в плазме крови. В смешанной слюне количество глюкозы превышает 0,06-0,17 ммолъ/л. Гормоны. В слюне определяется целый ряд гормонов, в основном, стероидов. В слюну они попадают из плазмы крови через слюнные железы, десневую жидкость, а также при приеме гормонов через рот. Таким образом, концентрация гормонов зависит от скорости слюноотделения, химической природы и молекулярной массы гормонов, В слюне обнаруживается кортизол, альдостерон, тестостерон, эстрогены и прогестерон, а также их метаболиты. Стероидные гормоны в слюне находятся, преимущественно, в свободном состоянии, и в небольших количествах в комплексе со стероидсвязывающими белками. Количество андрогенов и эстрогенов зависит от полового созревания и может меняться при патологии репродуктивной системы. Уровень прогестерона и эстрогенов в слюне, как плазме крови, меняется в зависимости от фазы менструального цикла. В норме в слюне также можно обнаружить инсулин, тироксин, тиреотропин, кальцитриол. Концентрация этих гормонов в слюне невелика и не коррелирует с показателями плазмы крови, поэтому их исследование малоинформативно.
|
Рис. 4.2 структура слюнного муцина
