Определение нитратов и нитритов в молоке колориметрическим методом
Принцип метода основан на восстановлении нитратов в нитриты цинком с последующим фотометрическим измерением интенсивности окраски комплекса, образующегося при взаимодействии нитритов с сульфаниловой кислотой и a-нафтиламином. Поскольку количество нитритов в молоке обычно незначительное, они определяются в сумме с нитратами. Содержание нитрат-ионов ( мг в 1дм3) устанавливают по градуировочному графику. Построение градуировочного графика. В шесть колб объемом 200-250 см3 внести цилиндром по 80 см3 одного и того же молока и затем в каждую из колб добавить дистиллированную воду, стандартный раствор азотнокислого натрия и растворы сернокислого цинка, железистосинеродистого калия и гидроокиси аммония в объемах и очередности, указанных в таблице 1.
Таблица 1 – Данные для построения градуировочного графика
После добавления каждого реактива содержимое колб вручную перемешивают круговыми движениями. Полученные стандартные смеси молока с реактивами фильтруют в конические колбы вместимостью 200-250 см3 до получения прозрачного фильтрата. Для восстановления нитратов в нитриты отбирают по 7 см3 полученных фильтратов в пробирки с притертыми пробками, добавляют 3 см3 20%-го раствора уксусной кислоты и 0, 3 г рабочего реактива для определения нитратов. Пробирки закрывают пробками и в течение 1 мин перемешивают, затем оставляют на 5 мин для развития окраски. Затем содержимое пробирок необходимо профильтровать через бумажный фильтр. Измеряют оптическую плотность фильтрата с зеленым светофильтром на фотоэлектроколориметре или на спектрофотометре при длине волны 538 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Окраска устойчива в течение 5- 20 мин. Величину оптической плотности окрашенных растворов стандартных смесей молока с реактивами определяют по отношению к раствору контрольной пробы. По полученным данным строят на миллиметровой бумаге 25х25 см градуировочный график. На оси абсцисс откладывают содержание нитрат-ионов, мг/дм3, на оси ординат соответствующие оптической плотности. Проведение анализа. В колбу объемом 200-250 см3 отмеривают цилиндром 80 смэ исследуемого молока и 93 см3 дистиллированной воды, бюретками – по 12 см3 растворов сернокислого цинка и калия железистосинеродистого, 3 см3 раствора гидроокиси аммония. Смесь перемешивают после добавления каждого реактива круговыми движениями. Полученную смесь фильтруют до получения прозрачного фильтрата. Затем из фильтрата отбирают 7 см3 образца. Далее анализ проводят, как указано выше (см. построение градуировочного графика). Одновременно готовится холостая проба с использованием 173 см3 дистиллированной воды и тех же количеств реактивов и операций. Величину оптической плотности окрашенного раствора пробы молока измеряют наспектрофотометре при длине волны 540 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм по отношению к раствору холостой пробы. Анализ проводят в двух параллельных пробах. Для каждой пробы снимают 2-3 показателя спектрофотометра и вычисляет среднее арифметическое результатов. Обработка результатов. Содержание нитрат-ионов в 1 дм3 анализируемого молока устанавливают по градуировочному графику на основании полученной величины оптической плотности при колориметрировании окрашенного раствора анализируемой пробы по отношению к холостой пробе раствора. Материалы и реактивы.. Стандартный раствор азотнокислого натрия (растворить 0,2741 г азотнокислого натрия в 100 см3 дистиллированной воды), в день использования 10 см3 этого раствора разбавить 20% раствором уксусной кислоты до 1000 см3 в мерной колбе. В полученном растворе содержится 20 мкг нитрат-ионов; раствор сернокислого цинка (растворить 267,5 г ZnSO4 x 7H2O в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 500 см3); раствор калия железистосинеродистого (растворить 86 г калия железистосинеродистого в дистиллированной воде в мерной колбе 500 см3); 20% раствор уксусной кислоты;раствор гидроокиси аммония (смешать 80 см3 25% гидроокиси аммония с 20 см3 дистиллированной воды); рабочий раствор для определения нитратов (смешать 100 г сернокислого бария, 10 г сернокислого марганца, 2 г цинковой пыли, 75 г лимонной кислоты, 4 г сульфаниловой кислоты, 2 г a- нафтиламина), готовить за 4 дня до анализа; пипетки, стеклянные воронки, стеклянные палочки, пробирки с притёртыми пробками, конические колбы на 200-250 см3, мерные колбы 1000 см3, спектрофотометр.
|