Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Зак. 1712.







Государственная фармакопея Республики Беларусь


 


геля, накрывают другим листом, удаляют воздушные пузырьки и завершают сборку рамки высушивания. Рамку помещают в сушилку и оставляют при комнатной температуре до высыхания геля.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССЫ

Молекулярные массы белков определяют, сравнивая их подвижность с подвижностью маркерных белков с известной молекулярной массой. Для градуирования гелей используют доступные готовые смеси равномерно окрашиваемых маркерных белков с точно известными молекулярными массами. Такие смеси доступны для различных диапазонов молекулярных масс. Концентрированные растворы белков с известной молекулярной массой разводят соответствующим буферным раствором для образцов и наносят на тот же гель, что и испытуемый образец.

Сразу после проведения электрофореза фиксируют электрофоретический фронт красителя бромфенолового синего. Это можно сделать нанесением насечки на край геля или введением иглы, смоченной индигокармином, в гель на линии фронта красителя. После окрашивания измеряют пройденное расстояние каждой белковой полосы (известной и неизвестной) от верха разделительного геля. Расстояние, пройденное -а-дым белком, делят на расстояние, пройденное красителем. Полученные результаты называются относительной подвижностью белков (относительно фронта красителя) и условно обозначаются Rr Строят график зависимости логарифма относительных молекулярных масс (М. м.) маркерных белков от условно полученных значений Rr Обычно график имеет слегка сигмовидную форму. Неизвестные молекулярные массы определяют с помощью линейной зависимости или интерполяцией графика зависимости Ig М. м. от Rr если значения, полученные для неизвестных образцов, располагаются на линейной части графика.

ВАЛИДАЦИЯ ИСПЫТАНИЯ

Результаты испытания признаются достоверными, если белки, которые являются маркерами молекулярных масс, расположены вдоль 80 % длины геля и по всей области разделения (то есть области, включающей образец и его димеры или образец и сопутствующие примеси), разделение соответствующих белковых полос проявляет линейную зависимость логарифма молекулярной массы от Rf Дополнительные требования к валидации по отношению к испытуемым растворам указываются в частной статье.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИМЕСЕЙ

Если в частной статье указывают предел содержания примесей, в испытании необхо-


димо использовать раствор сравнения соответствующего разведения. Например, если предел содержания примесей составляет 5 %; необходимо использовать раствор сравнения, разведенный по отношению к испытуемому раствору в соотношении 1:20. На электрофореграмме испытуемого раствора ни одна примесь (ни одна полоса, кроме основной) не должна быть интенсивнее основной полосы на электрофореграмме раствора сравнения.

Для валидированной методики содержание примесей может определяться методом внутренней нормализации по отношению к основной полосе с использованием интегрирующего денситометра. При валидации методики необходимо подтвердить линейность сигнала.

01/2013:20232







Дата добавления: 2015-09-04; просмотров: 403. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!




Аальтернативная стоимость. Кривая производственных возможностей В экономике Буридании есть 100 ед. труда с производительностью 4 м ткани или 2 кг мяса...


Вычисление основной дактилоскопической формулы Вычислением основной дактоформулы обычно занимается следователь. Для этого все десять пальцев разбиваются на пять пар...


Расчетные и графические задания Равновесный объем - это объем, определяемый равенством спроса и предложения...


Кардиналистский и ординалистский подходы Кардиналистский (количественный подход) к анализу полезности основан на представлении о возможности измерения различных благ в условных единицах полезности...

Принципы и методы управления в таможенных органах Под принципами управления понимаются идеи, правила, основные положения и нормы поведения, которыми руководствуются общие, частные и организационно-технологические принципы...

ПРОФЕССИОНАЛЬНОЕ САМОВОСПИТАНИЕ И САМООБРАЗОВАНИЕ ПЕДАГОГА Воспитывать сегодня подрастающее поколение на со­временном уровне требований общества нельзя без по­стоянного обновления и обогащения своего профессио­нального педагогического потенциала...

Эффективность управления. Общие понятия о сущности и критериях эффективности. Эффективность управления – это экономическая категория, отражающая вклад управленческой деятельности в конечный результат работы организации...

Йодометрия. Характеристика метода Метод йодометрии основан на ОВ-реакциях, связанных с превращением I2 в ионы I- и обратно...

Броматометрия и бромометрия Броматометрический метод основан на окислении вос­становителей броматом калия в кислой среде...

Метод Фольгарда (роданометрия или тиоцианатометрия) Метод Фольгарда основан на применении в качестве осадителя титрованного раствора, содержащего роданид-ионы SCN...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2025 год . (0.01 сек.) русская версия | украинская версия