Флуоресцентные детекторы

Флуориметр находит применение в экологической химии, биологии, медицине, при анализе пищевых продуктов, витаминов, стероидов.

В тех случаях, когда сам по себе образец не флуоресцирует, можно до или после разделения исследуемого образца на колонке получить соответствующие производные. Чувствительность флуориметров в 100 раз превышает чувствительность УФ-детекторов, однако линейный диапазон для них более узкий — 104.

В флуориметрических детекторах можно использовать любой источник света с фильтром или монохроматором, важно, что освещение данного объема исследуемого образца должно проводиться по наиболее короткому световому пути.

В качестве источников излучения обычно используются газоразрядные лампы: ртутная (254 нм), цинковая (214 и 308 нм), кадмиевая (229, 326 нм; предел обнаружения составляет 5 • 10^-10 г), источник в-частиц от 63Ni-радиоактив-ного источника.

При флуоресцентном детектировании имеют дело с достаточно разбавленными растворами. Количество флуоресцентного света, излучаемого возбужденными молекулами, пропорционально интенсивности источника возбуждающего излучения, объему освещаемого раствора пробы, концентрации раствора обнаруживаемого соединения.

Поглощение в УФ-области проводят при длине волны максимального поглощения для данной группы соединений. Излучение измеряют на выходе фильтра, не пропускающего лучи возбуждения. Длина волны флуоресцентного излучения должна быть больше длины волны поглощенного света. Подвижная фаза не должна поглощать свет ни на длине поглощения, ни на длине волны излучения.

Длину волны возбуждающего излучения рекомендуется выбирать таким образом, чтобы образовывалось максимальное количество молекул в возбужденном состоянии, возврат которых в основное состояние происходил бы в результате излучения. Этому также благоприятствует использование мицеллярных растворов для индуцирования флуоресценции при комнатной температуре.

В тех случаях, когда необходимо существенно понизить предел обнаружения, следует применять фильтр, дающий максимально возможное светопропускание на выбранной длине волны возбуждающего излучения, и максимально снизить интенсивность излучения с большей длиной волны.

Факторы, способные искажать результаты измерения флуоресценции:
1. Примеси, содержащиеся в элюенте, и, в первую очередь, растворенный кислород, способны вызывать гашение флуоресценции.
2. Рассеянный свет от источника возбуждающего излучения, который возникает из-за наличия в элюате крупных молекул других рассеивающих излучение частиц. Перед началом работы следует убедиться в отсутствии фоновой флуоресценции.