ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ. Тонкослойная хроматография (ТСХ) - вид хроматографии, в которой разделение обеспечивается движением подвижной фазы через нанесенный на подложку тонкий слой

Тонкослойная хроматография (ТСХ) - вид хроматографии, в которой разделение обеспечивается движением подвижной фазы через нанесенный на подложку тонкий слой сорбента. Продвижение элюента по пластине обеспечивается капиллярными силами. Существует несколько вариантов ТСХ, различающихся способом подачи растворителя. Наиболее распростра­нен вариант с восходящим элюированием. В этом случае элюент наливают на дно хроматографической камеры, а нижний край пластины с нанесен­ными пробами помещают в растворитель. Фронт элюента при этом переме­щается снизу вверх. Известны также варианты с нисходящим, горизонта­льным и радиальным способом подачи элюента.

В зависимости от режима подачи элюента различают ТСХ непрерывного, многократного, ступенчатого, градиентного и двумерного элюирования (элюирование в двух взаимно перпендикулярных направлениях).

Для ТХС применяют выпускаемые промышленностью пластины с закреп­ленным слоем сорбента - силикагелем и оксидом алюминия. Анализируемый раствор объемом 1-5 мкл наносят на пластину с помощью микрошприца или микропипетки. Пробу растворяют в легко испаряющихся растворителях, чтобы размер пятна на пластине был минимальным.

Пластину с нанесенными пробами помещают в камеру для хроматографи­рования. Камера представляет собой плотно закрывающийся сосуд с плоскими стенками. В камере необходимо создать атмосферу, насыщенную парами выбранного растворителя, для устранения краевого эффекта - явления перемещения пятен, находящихся по краям пластины со скорос­тью, отличных от скорости средних пятен.

Выбор элюента в ТХС аналогичен выбору состава элюента в адсорбци­онной хроматографии; предпочтительно применение одно- или двухкомпо­нентных элюентов для облегчения воспроизводимости условий ТХС.

Для оценки степени удерживания применяют величину R_f, равную соот­ношению длины пути вещества к длине пути растворителя от линии старта. Эта величина аналогична коэффициенту емкости (k) в ВЖХ.

Если компоненты смеси окрашены, то они четко видны на пластине после разделения в виде пятен. В случае неокрашенных соединений хроматограмму проявляют в парах йода (коричневое окрашивание пятен) в специальной камере или опрыскивают каким-либо специфическим реаген­том, дающим с компонентами пробы окрашенные соединения. Часто в состав нанесенного слоя готовых пластин вносят люминофор, тогда при облучении пластины УФ лампой при 254 нм пластина флуоресцирует, а разделенные компоненты пробы видны в виде темных пятен.

Методом ТХС возможно не только качественное, но и количественное определение. Количественную оценку можно проводить как непосредствен­но на пластине, так и после перенесения пятна с пластины в приемник.

При определении непосредственно на пластине измеряют площадь пятна каким-либо методом. Предварительно строят градуировочный график в координатах m = f (√ S); S - площадь пятна, m - масса вещества. При содержании вещества в пределах 1-80 мкг эта зависимость линейна.