Определение общих липидов по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом

Продукты распада ненасыщенных липидов, полученные в результате гидролиза липидов серной кислотой, образуют с реактивом, состоящим из фосфорной кислоты и ванилина, стабилизированный и окрашенный в красный цвет, комплекс. Интенсивность окраски комплекса пропорциональна содержанию общих липидов.

Техника определения. К 0,05 см³ опытного раствора (экстракт липидов) прибавляют 2,5 см³ концентрированной серной кислоты. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и помешают на 10 минут в кипящую водяную баню. Контрольную колбу ставят как опытную, но вместо экстракта липидов берут 0,05 см³ воды. Пробирки вынимают и охлаждают водой до температуры 18-25 ⁰С. Из каждой пробирки отбирают по 0,2 см³ смеси и переносят в пробирку с 3 см³ фосфорнованилиновой смеси. После перемешивания пробы оставляют на 45 минут в темноте. Измеряют поглощение на ФЭК при 500-560 нм (зеленый светофильтр). Для построения калибровочного графика из основного раствора (стандартного) готовят рабочие стандарты, как указано в таблице 2.

Таблица 2 – Данные к построению калибровочного графика

определения липидов

Из каждого разведения берут по 0,05 см³, обрабатывают как опытные пробы.

Концентрацию липидов определяют по формуле

,

где С_оп – концентрация липидов в опытной пробе; А_оп – поглощение опытного образца раствора; А_ст – поглощение стандартного раствора; С_ст – концентрация основного раствора стандартного.

Материалы, реактивы и оборудование. Серная кислота (концентрированная), ортофосфорная кислота (концентрированная), 0,6 %-й: раствор ванилина; фосфорнованилиновая смесь – 4 части концентрированной ортофосфорной кислоты смешивают с 1 частью 0,6 %-го раствора ванилина; хлороформ; стандартный раствор триолеина (12 мг/см³) в хлороформе; пробирки, пипетки на 0,1 см³ и на 1 см³, бюретки на 50 см³, водяная баня, фотоэлектроколориметр (ФЭК).