Анализ аминокислотного состава белков

 

Лабораторная работа № 1

Цветные реакции на белки

 

Цель работы: изучение особенностей белов, их физико-химических свойств и определение характерных отличий белков животного и растительного происхождения.

 

Оборудование, реактивы и материалы: набор пробирок в штативе, держалки для пробирок, капельницы, спиртовки, резиновые груши; концентрированные азотная и серная кислоты, раствор гидроксида натрия с массовой долей 10 %, раствор сульфата меди с массовой долей 10 %, раствор ацетата свинца с массовой долей 5 %, реактив Миллона (80 г ртути растворяют под тягой при постоянном нагревании на водяной бане в 114 см3 концентрированной соляной кислоты, к раствору приливают 400 см3 воды, перемешивают и через 30 мин сливают жидкость с отстоявшегося осадка), ацетоновый раствор нингидрина с массовой долей 0, 1 %, концентрированный раствор аммиака, насыщенный раствор молибдата аммония в серной кислоте; раствор казеина (в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0, 2 г казеина, добавляют 20 см3 раствора гидроксида натрия с массовой долей 0, 4 % и растворяют при нагревании, после полного растворения объем смеси в колбе доводят до метки); белок куриного яйца растворяют в 100 см3 дистиллированной воды; раствор желатина (в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0, 5 г желатина, добавляют 10 см3 1 моль/дм3 раствора ацетата натрия и полностью растворяют, объем смеси доводят до метки дистиллированной водой); белки злаковых или бобовых (3-5 г муки злаковых или бобовых вносят в колбу вместимостью 100 см3, добавляют 20-30 см3 раствора сульфата аммония с массовой долей 10 %, встряхивают и оставляют настаиваться в течение 30 мин при комнатной температуре (18±2)°С, нерастворившийся осадок отфильтровывают); белки мяса (50 г измельченного мяса помещают в стакан, добавляют 100 см3 раствора хлорида натрия с массовой долей 10 % и экстрагируют мышечный альбумин и глобулин при постоянном перемешивании в течение 20 мин, отфильтровывают через бумажный фильтр, полученный экстракт используют для анализа).

Теоретические сведения

 

Наличие специфических связей и химических группировок, содержащихся в аминокислотных радикалах полипептидной цепи белка, определяют характерные цветные реакции. Реакционная способность и интенсивность окраски образующихся продуктов указывает на особенности химической структуры веществ и их количественное содержание. На основе цветных реакций разработаны и широко применяются методы количественного и качественного анализа белковых веществ.