Ход работы. Вырезают четыре ленты фильтровальной бумаги шириной 2 см, длиной 25 см

 

Вырезают четыре ленты фильтровальной бумаги шириной 2 см, длиной 25 см. Ленты тщательно смачивают ацетатным буфером. Отмечают карандашом середину каждой ленты. Из плотной фильтровальной бумаги вырезают четыре узкие полоски (0, 5 см шириной и 2, 0 см длиной), смачивают каждую из них соответствующим раствором аминокислот: глицина, лизина, аспарагиновой кислоты и исследуемого образца. Затем помещают на отмеченные линии старта фильтровальной бумаги, смоченной ацетатным буфером. Ленты бумаги с пробами аминокислот вносят в ванну электрофоретической установки, отмечают анод и катод и проводят электрофорез при напряжении 250-300 В и силе тока 5-10 мА в течение 3 ч.

По окончании электрофореза ленты высушивают в сушильном шкафу и проявляют нингидрином. Определяют фронт аминокислот.

 

 

Оформление результатов

После нахождения фронта аминокислот сопоставляют полученные данные с электрофореграммой исследуемого образца, заполняют таблицу и делают вывод о присутствии в исследуемом образце матрикантов.

 

Наименование объекта	Фронт, пройденный аминокислотой	Присутствие в исследуемом объекте
Глицин Лизин Аспарагиновая кислота

 

Контрольные вопросы и задания

1. Что называют электрофорезом? С какой целью проводят электрофоретические исследования?

2. Какие типы носителей используют для разделения и идентификации аминокислот?

3. В чем суть метода идентификации аминокислот с помощью электрофореза?

 

Лабораторная работа № 4

Разделение аминокислот методом восходящей хроматографии

Цель работы: разделение и идентификация аминокислот в исследуемом образце методом восходящей хроматографии.

 

Оборудование, реактивы и материалы: стеклянные хроматографические колонки, фильтровальная бумага, ножницы, карандаш, линейка, пипетки, колбы, фарфоровые ступки, технические весы, сушильный шкаф; фенол, насыщенный водой (отношение фенола к воде составляет 2: 1), раствор нингидрина в ацетоне с массовой долей 0, 4 % или раствор нингидрина в этаноле с массовой долей 0, 1 %; исследуемый раствор аминокислот, яблоко, лук, морковь (1 г исследуемого материала растирают в фарфоровой ступке с песком, экстрагируют с 4 см3 этанола, фильтруют через бумажный фильтр, фильтрат используют для исследования), молочная сыворотка, освобожденная от белков и высокомолекулярных пептидов (к 20 см3 сыворотки добавляют 1 см3 раствора трихлоруксусной кислоты с массовой долей 50 %, оставляют на 30 мин для осаждения высокомолекулярных белковых веществ, отделяют осадок фильтрованием, фильтрат используют для анализа).

 

Теоретические сведения

 

Метод основан на различной способности аминокислот к растворению в органических растворителях и воде, обусловленной их структурными особенностями.

В процессе хроматографии органический растворитель, перемещаясь вдоль фильтровальной бумаги, увлекает растворенные в нем аминокислоты.

Каждая аминокислота проходит определенное расстояние. Отношение этого расстояния к расстоянию, пройденному фронтом растворителя называется коэффициентом R_f.

В воздушно-сухом состоянии фильтровальная бумага cодержит до 20-25 % воды. Эта вода является неподвижной фазой распределения. Подвижная фаза распределения – органический растворитель. Фильтровальная бумага выполняет функции хроматографической колонки, через которую проходит растворитель и растворенная в нем смесь аминокислот. Чем больше растворимость аминокислоты в органическом растворителе, тем дальше пройдет эта аминокислота и тем ближе подойдет к фронту растворителя.