Формольного титрования

 

Цель работы: освоение количественного определения аминного азота методом формольного титрования

 

Оборудование, реактивы и материалы: технические весы, фарфоровые ступки, мерные колбы вместимостью 100 см³, бумажные фильтры или центрифуга, мерный цилиндр вместимостью 10 см³, мерные пипетки вместимостью 20 см³ или мерный цилиндр вместимостью 50 см³; раствор гидроксида натрия с концентрацией 0, 2 моль/дм³, раствор соляной кислоты с концентрацией 0, 2 моль/дм³, спиртовой раствор фенолфталеина с массовой долей 1 %, раствор гидроксида натрия с концентрацией 0, 1 моль/дм³, формольная смесь (50 см³ раствора формалина с массовой долей 30 % и 0, 1 см³ спиртового раствора фенолфталеина с массовой долей 1 %; смесь доводят раствором гидроксида натрия с концентрацией 0, 2 моль/дм³ до слабо-розового цвета); молоко, солод (10 г солода растирают с кварцевым песком, добавляют 10 см³ дистиллированной воды, перемешивают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, доводят дистиллированной водой до метки, фильтруют через бумажный фильтр или центрифугируют, фильтрат используют для анализа).

 

Теоретические сведения

 

Расщепление белков сопровождается появлением аминокислот, которые содержат свободные a-карбоксильные и аминогруппы. Метод определения аминного азота свободных амино-групп предполагает равенство карбоксильных и аминогрупп в молекуле аминокислоты. Аминогруппы блокируют формальдегидом, при этом образуются соответствующие метиленаминокислоты:

 

 

глицин формальдегид

метилглицин

 

Карбоксильные группы оттитровывают щелочью:

 

H₂C = N – CH₂ – COOH + NaOH ® H₂C = N - CH₂ – COONa + H₂O.

 

Практически большинство аминокислот характеризуется присутствием в их молекуле двух аминогрупп или двух карбоксильных групп. С целью устранения данной погрешности перед титрованием щелочью необходимо нейтрализовать дополнительные карбоксильные или аминогруппы. Так как большинство белков имеет явно кислый характер, то, как правило, нейтрализацию осуществляют добавлением щелочи до нейтральной реакции среды.

 

Ход работы

 

Определение аминного азота в солоде. В коническую колбу вместимостью 250 см³ наливают 20 см³ фильтрата, добавляют 10 см³ формольной смеси и титруют раствором гидроксида натрия с концентрацией 0, 2 моль/дм³ до появления ярко-розовой окраски. Избыток щелочи оттитровывают раствором соляной кислоты с концентрацией 0, 2 моль/дм³ до бледно-розовой окраски.

Параллельно проводят контрольный опыт, для которого вместо фильтрата берут 20 см³ дистиллированной воды. Все остальные операции осуществляют аналогично.

Массовую долю аминного азота рассчитывают по формуле

 

 

где (а – б) – разность объемов растворов щелочи и кислоты, израсходованных на титрование контрольного образца, см³;

V ₁ – общий объем вытяжки, см³;

V ₂ – объем вытяжки, взятой на титрование, см³;

q – масса навески исследуемого продукта, г;

2, 8 – масса аминного азота, мг, соответствующая 1 см³

раствора гидроксида натрия с концентрацией 0, 2 моль/дм³.

 

Определение аминного азота в молоке. В коническую колбу отмеривают пипеткой 20 см³ молока и 0, 5 см³ раствора фенолфталеина. Через 2 мин титруют раствором гидроксида натрия до появления бледно-розовой окраски. Затем в пробу добавляют 5 см³ раствора формалина. Через 2 мин обесцветившуюся пробу повторно оттитровывают тем же раствором гидроксида натрия до бледно-розовой окраски.

Массовую долю аминного азота А, %, в молоке вычисляют по формуле

 

А = а × 0, 959,

 

где а – объем раствора гидроксида натрия, пошедший на второе титрование, см³;

0, 959 – коэффициент пересчета, установленный экспериментально.

 

Оформление результатов

 

Экспериментальные денные вносят в таблицу.

 

Наименование объекта исследований	Массовая доля, %
Солод Молоко

 

Контрольные вопросы и задания

 

1. Какие группы блокирует формальдегид при титровании белков методом формольного титрования?

2. Из предложенных вариантов выберете правильный ответ: при определении белков методом формольного титрования после блокирования аминогрупп формальдегидом с помощью раствора гидроксида натрия титруются: а) аминогруппы, оставшиеся незаблокированными, б) карбоксильные группы, в) метильные группы, г) сульфгидрильные группы.

3. При определении аминного азота методом формольного титрования готовили вытяжку из 5 г солода. На титрование опыта израсходовано 10 см³ раствора гидроксида натрия и 2 см³ раствора соляной кислоты. На контрольное титрование – 4, 0 и 3, 5 см³ растворов щелочи и кислоты соответственно. Рассчитать содержание аминного азота определенного методом Кьельдаля.

 

Лабораторная работа № 12