Метод оседания

Простейший метод бактериологического иссле­дования воздуха - метод оседания, который основан на оседании бактериальных частиц и капель под влиянием силы тяжести на поверхности агара открытой чашки Петри. Чашки с МПА экспонируют 5-10-15 минут в зависимости от предполагаемого бактериального загрязнения. Метод оседания не дает количественного представления о содержании микро­флоры в воздухе, так как на открытых чашках плохо улавливаются тон­кодисперсные фракции бактериальных капель и пылевых частиц, а за­держиваются главным образом крупные пылевые частицы, которые оседают или прибиваются токами воздуха к поверхности среды. Поэто­му перерасчет по Омелянскому (на поверхность 100 см² агара оседает за 5 минут такое количество бактерий, которое содержится в 10 л воздуха) малопригоден для количественного изучения микрофлоры воздуха по­мещений и абсолютно не пригоден для атмосферного воздуха, где имеют место большие колебания в скорости его движения. Тем не менее метод оседания может быть использован в тех случаях, когда отсутствуют бо­лее совершенные приборы и методы или когда нет источника электро­энергии. Для расчета микробного числа воздуха используют следую­щую формулу:

 

 

где X- количество микробов в 1 m³ воздуха; а- количество колоний в чашке; в - площадь чашки (см. таблицу 3); t - время экспозиции; 5 - вре­мя экспозиции; 10 - объем воздуха, из которого происходит оседание микробов за 5 минут, л; 100 - площадь, на которую происходит оседание, см²; 1000 - объем воздуха, л.

 

Таблица 3

 

Площадь чашки в зависимости от диаметра

 

Диаметр чашки, см Площадь чашки, см²

8 50

9 63

10 78, 5

Простейшие аспирационные методы основаны на улавливании бактерий жидкостью. Через сосуд с определенным объемом изотонического раствора NaCI или водопроводной воды просасывают (с помощью воздуходувки, пылесоса, насоса и др.) определенный объем воздуха. Затем проводят высев на МПА по 0, 1-0, 2 мл улавливающей жид­кости. В случае большего объема полученной суспензии часть улавливающей жидкости профильтровывают через мембранные фильт­ры №2 или №3 с последующим посевом фильтров на поверхность плот­ных питательных сред.

Среди приборов для исследования воздуха помещений самым рас­пространенным является прибор Кротова. Механизм улавливания мик­рофлоры основывается на ударно-прибивном действии струи воздуха, который проходит через узкую клиновидную щель и с большой скоро­стью ударяется о влажную поверхность питательной среды. В результате удара находящиеся в воздухе аэрозоли, в том числе содержащие бакте­рии пылевые частицы и капли, прибиваются к поверхности МПА или элективных сред. Во время отбора пробы воздуха чашка Петри вращает­ся вместе со столиком, благодаря чему достигается равномерное обсеме­нение поверхности агара микрофлорой воздуха. Для отбора проб следует подбирать чашки Петри с плоским дном, а количество питательной сре­ды в чашке не должно превышать 15 мл. Прибор Кротова характеризуется эффективностью улавливания микрофлоры в пылевой фазе аэрозоля, дает четкие сопоставимые ре­зультаты, прост в работе, позволяет за короткое время произвести отбор проб воздуха непосредственно на чашки Петри с МПА или элективны­ми средами. Производительность прибора - от 20 до 40 л/мин. Основной недостаток прибора состоит в том, что для работы он нуждается в элек­троэнергии. Это ограничивает возможности его применения для иссле­дования атмосферного воздуха.

Для исследования атмосферного воздуха используется ряд прибо­ров, в которых аэрозоль улавливается в жидкую среду. Принцип уст­ройства этих приборов прост. Они представляют собой стеклянные ем­кости, в которых через отверстия в пробке пропущены две трубки. Одна трубка кончается чуть ниже пробки и соединена с аспиратором, другая - опущена на дно цилиндра, куда поступает исследуемый воздух. В ци­линдр наливают стерильный изотонический раствор хлорида натрия или водопроводную воду (жидкости, не образующие пену) и через них про­сасывают определенный объем воздуха. В качестве аспиратора могут быть использованы воздуходувки, пылесосы, насос. Посев жидкости производят на питательный агар или дифференциальные среды. На МПА засевают по 0, 1-0, 2 мл улавливающей жидкости, а на элективные среды - по 0, 3-0, 5 мл. Для исследования атмосферного воздуха используются также приборы-бактериоуловители, т. е. трубки с размещенными в них плотными фильтрами (хлопчатобумажная или стеклянная вата). После окончания отбора пробы воздуха в количестве 100-300 л ватный тампон помещают в склянку с изотоническим раствором хлорида натрия и тщательно от­мывают встряхиванием со стеклянными бусами. Полученную суспензию подвергают бактериологическому анализу посевом на поверхность плотных питательных сред.