Ход работы. Для изучения аммонификации белковых веществ в качестве питательной среды можно использовать мясной бульон с добавлением 3% пептона

Для изучения аммонификации белковых веществ в качестве питательной среды можно использовать мясной бульон с добавлением 3% пептона. По 30 мл среды разливают в эрленмейеровские колбы ёмкостью 100 мл и добавляют по одной трети чайной ложки почвы. Колбы закрывают ватными пробками. Над средой подвешивают две бумажки: красную лакмусовую, смоченную дистиллированной водой (для обнаружения выделяющегося аммиака), и фильтровальную, смоченную уксуснокислым свинцом, закрепляя их между пробкой и стенкой горлышка колбы. Бумажки не должны касаться среды. Сверху колбы прикрывают пергаментной бумагой. На 3-5 сутки инкубации при температуре опыт заканчивают и содержимое в колбе анализируют. Определяют продукты жизнедеятельности микроорганизмов при разложении белка и возбудителей процесса.

Исследование возбудителей гнилостного распада белковых веществ. Для обнаружения возбудителей готовят препарат живых бактерий (в раздавленной капле), а также фиксированный и окрашенный. Чаще других в препарате встречаются подвижные клетки Proteus vulgaris, преобладающие на первых стадиях распада белков. Это неспорообразующие, неодинаковой длины палочки. Кроме того, на препарате много спорообразующих клеток Bac. mycoides и Clostridium putrificus, у которых споры расположены терминально, и диаметр их шире клетки. Bac. mycoides вызывает аммонификацию белковых веществ в аэробных условиях. Proteus vulgaris – факультативный анаэроб, а Clostridium putrificus вызывает аммонификацию в анаэробных условиях. Последняя форма может развиваться как аэроб, если в среде находятся аэробные микроорганизмы, поглощающие кислород.

Для определения продуктов гнилостного распада белка делают следующие анализы:

- Проба на аммиак. Выделяющийся в атмосферу аммиак улавливается подвешенной красной лакмусовой бумажкой, которая при этом синеет;

- Накопление аммиака в субстрате устанавливают с помощью реактива Несслера. Реакция капельная. На фарфоровые пластинки с лунками или в чашки помещают каплю реактива Несслера, затем каплю субстрата. При большом количестве аммиака образуется коричневый или буроватый осадок, при небольшом – появляется оранжевая или жёлтая окраска;

- Проба на сероводород. Его обнаруживают с помощью подвешенной фильтровальной бумаги, смоченной уксуснокислым свинцом : бумага чернеет. Появление на ней серебристого налёта свидетельствует, что наряду с сероводородом выделяются ещё и меркаптаны (например, метилмеркаптан );

- Проба на индол. Для выявления индола пользуются или реакцией Сальковского, или реакцией с парадиметиламидобензальдегидом. В первом случае к 10 мл субстрата добавляют 1мл 0, 2% и несколько капель концентрированной серной кислоты. При взаимодействии этих веществ с индолом происходит красно-фиолетовое окрашивание. Эту реакцию даёт также индолилуксусная кислота. Вторая реакция на индол более специфична. К 10 мл субстрата (однодневной культуры) добавляют 5мл насыщенного раствора сернокислого калия. При наличии индола наблюдается интенсивно-красное окрашивание.