Определения групп крови
Применяются различные варианты реакции агглютинации: развернутая, ориентировочная Для определения у больного антител ставят в пробирках развернутую реакцию агглютинации: к разведениям сыворотки крови больного добавляют диагностикум (взвесь убитых микробов) и через несколько часов инкубации при 37 0С отмечают наиболшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация. Если необходимо определить возбудитель, выделенный от больного, ставят ориентировочную реакцию агглютинации на предметном стекле. К капле диагностической агглютинирующей сыворотки в разведении 1: 10 или 1: 20 добавляют чистую культуру возбудителя. Рядом ставят контроль: вместо сыворотки наносят каплю физиологического раствора. При появлении в капле с сывороткой и микробами хлопьевидного осадка ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках. Одновременно учитываются контроли: сыворотка, разведенная изотоническим раствором натрия хлорида должна быть прозрачной, взвесь микробов в том же растворе равномерно мутной без осадка. В ориентировочной РА пользуются адсорбированными агглютинирующими сыворотками, из которых удалены перекрестно реагирующие антитела. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА) основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности АГ или АТ, взаимодействие которых с соответствующими АТ или АГ сыворотки крови больных вызывает склеивание и при положительных результатах происходит выпадение эритроцитов на дно полистироловой пластины в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают на дно пластины в виде «пуговки».РНГА применяют для диагностики инфекционных болезней (дифтерии, дизентерии, сальмонеллеза, туляремии и др.), определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительности к лекарственным препаратам, гормонам. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на блокаде, подавлении антигенов вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты. РТГА применяют для диагностики многих вирусных болезней (гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита). Реакция преципитации – это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Реакции преципитации ставят в пробирках (р.кольцепреципитации), в гелях, питательных средах. Трупный материал, кожевенное и меховое сырье, из которого трудно выделить сибиреязвенные бациллы, подвергают серологическому исследованию с помощью реакции термопреципитации (реакция Асколи).Реакцию кольцепреципитации проводят в узких преципитирующих пробирках с иммунной сывороткой, на которую наслаивают растворимый антиген. В положительных результатах на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата. Реакция преципитации в агаре для определения дифтерийного экзотоксина……. Реакция связывания комплемена (РСК). Для постановки реакции связывания комплемента необходимы следующиеедиенты: 1)испытуемая сыворотка (АТ); 2)антиген – убитая взвесь возбудителей того или иного заболевания; 3) комплемент; 4) гемолитическая сыворотка; 5) эритроциты барана. РСК заключается в том, что при соответствии друг другу антигены и антитела образуют иммунный комплекс, к которому присоединяется комплемент, т.е. происходит связывание комплемента комплексом антиген-антитело. Если же комплекс антиген-антитело не образуется, то комплимент остается свободным. РСК проводят в две фазы: 1-я фаза – инкубация смеси, содержащей три компонента антиген + антитело+ комплемент; 2-я фаза индикаторная – выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей к ним антитела. В положительной реакции из-за связывания комплемента с комплексом антиген-антитело гемолиз эритроцитов непроизойдет и они осядут на дно пробирки в виде «зонтика». В отрицательных случаях связывание комплемента с комплексом антиген-антитело не происходит, он остается свободным и присоединятся к комплексу эритроции-гемолитическая сыворотка, тем самым вызывая гемолиз эритроцитов. РСК применяют для диагностики многих инфекционных заболеваний, в частности сифилиса (р.Вассермана), сыпного тифа и др. Реакция нейтрализации проводят путем введения смеси антиген-антитело лабораторным животным. Например, для обнаружения ботулинического токсина белым мышам подкожно или внутрибрюшинно вводят вытяжку из остатков пищи (грибы) с антитоксическими ботулиническими сыворотками типов А, В, С, Е. Сыворотки получают из крови лошадей или крупного рогатого скота гипериммунизированых ботулиническими токсинами. При отсутствии у животных повреждающего действия микроорганизмов, их токсинов (мышь осталась жива) говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса АГ-АТ.
|
