Б) Метод поверхностного посева

В тех случаях, когда после подсчета колоний может возникнуть необходимость в выделении чистой культуры и ее идентификации для определения количества жизнеспособных микроорганизмов, используют метод поверхностного посева. Питательную среду разливают в чашки Петри и после застывания подсушивают, переворачивая чашки вверх дном и выдерживая их открытыми в термостате 30 мин при температуре 37^о С (или в ламинарном боксе 1-2 ч). В центр маркированной чашки Петри вносят заданное количество (чаще всего 0,1 или 0,2 см³) исследуемого жидкого материала или его разведения и немедленно равномерно распределяют по поверхности среды стерильным стеклянным или пластиковым шпателем до тех пор, пока на агаре не останется видимых следов жидкости. Чашки с посевами переворачивают, помещают в термостат, установленный на соответствующий температурный режим.

Подсчёт микробных колоний проводят сразу же после извлечения чашек из термостата, а если это невозможно, их хранят в холодильнике не более 24 ч. При подсчете колоний учитывают рост микроорганизмов только с заданными культуральными свойствами, а при использовании элективных сред – с соответствующими биохимическими характеристиками.

Колонии микроорганизмов подсчитывают визуально или при помощи лупы с 2-5-кратным увеличением. Чашку вверх дном кладут на черный лист бумаги, каждую подсчитанную колонию отмечают со стороны дна чашки карандашом или маркером для стекла. Желательно оценивать только те разведения, при посеве которых на чашках вырастает от 30 до 300 колоний (а при посеве нативного материала – от 1 до 300 колоний). Если большое количество колоний трудно подсчитать, то с помощью стеклянной пластинки с сеткой со стороной квадрата 1 см подсчитывают колонии в разных местах чашки в 20 квадратах площадью 1 см², выводят среднее арифметическое в одном квадрате и умножают на площадь чашки в сантиметрах. В специализированных лабораториях используют специальные приборы - специальные ручки-счетчики, счетные камеры, счетчик колоний бактерий, с помощью которого подсчет колоний осуществляется за 0,2 сек. Результат определения КМАФАнМ выражают числом КОЕ (колониеобразующих единиц) в 1 см³ пробы.

Чтобы результаты выразить количеством микробов в 1 см³ исследуемого объекта или продукта, число выросших на чашке колоний умножают на степень разведения пробы и вычисляют среднее арифметическое количество колоний, подсчитанных на двух чашках.

Методика выявления и определения количества