Трансформация

Трансформация — передача свободных фрагментов ДНК (плазмидной или хромосомной) от донорской клетки к реципиентной без их непосредственного контакта и образование на этой основе рекомбинанта (рис. 74, III). При трансформации среди бактериальных популяций могут распространяться гены, кодирующие факторы патогенности, резистентность к антибиотикам, однако в обмене генетической информацией трансформация играет незначительную роль.

Впервые явление трансформации было обнаружено на пневмококках при изучении переноса наследственных признаков от капсульных вирулентных пневмококков, убитых при нагревании, к живым бескапсульным клеткам пневмококков, не обладающим вирулентностью. Активным началом в этом процессе являлась ДНК.

Трансформация может произвольно происходить в природе у некоторых видов бактерий, чаще у Грам+, причем не только в пределах одного вида, но и между разными видами. Однако чем дальше отстоит один вид от другого в таксономическом отношении, тем меньше частота межвидовой трансформации.

Типы трансформации.

1. Абортивная трансформация —как правило, любая чужеродная ДНК, попадающая в бактериальную клетку, расщепляется рестрикционными эндонуклеазами.

2. Интегративная трансформация — чужеродная ДНК интегрируется в геном бактерии.

После поглощения ДНК клетками начинаются ее преобразования, предшествующие рекомбинации с хромосомой: разрывы ДНК на более короткие фрагменты и расплетание двунитевой ДНК на однонитевые участки. Затем такие нити образуют синапс с гомологичными участками хромосомы реципиента и рекомбинируют с ними, замещая одну из нитей ДНК хромосомы. В момент замещения хромосома в определенном участке имеет одну свою и одну чужую нить ДНК. При последующей репликации происходит образование двух новых нитей на своей и чужой матрице. Отражением этого является то, что в колонии, выросшей из клетки-трансформанта, содержится обычно смесь исходных реципиентных клеток и рекомбинантных клеток, наследовавших признаки обоих родительских штаммов.

Трансформация используется для картирования хромосом, поскольку трансформированные клетки включают различные фрагменты ДНК. Определение частоты одновременного приобретения двух заданных характеристик (чем ближе расположены гены, тем более вероятно, что они оба включатся в один и тот же участок ДНК) дает информацию о взаиморасположении соответствующих генов в хромосоме. При трансформации клетка поглощает менее 1% всего генома донора. Поэтому генетические карты, построенные посредством трансформации, показывают последовательность располо­жения генов лишь на небольших участках бактериальных хро­мосом.

К трансформации примыкают явления, в основе которых также лежит поглощение ДНК бактериальной клеткой. Одно из них — трансфекция, когда клетки поглощают искусственно выделенную фаговую ДНК. В результате в клетке начинается развитие фага с последующим лизисом клетки и освобождением зрелых фаговых частиц. Таким же путем можно ввести в бактерию плазмидную ДНК, передать рекомбинантную ДНК, сконструированную генно-инженерными методами, и передать в живую бактериальную клетку ДНК разного происхождения. Перенос экстрагированной ДНК является основным методом генной инженерии, используемым при конструировании рекомбинантных штаммов с заданным геномом.