Студопедия — Тонкослойная хроматография липидов
Студопедия Главная Случайная страница Обратная связь

Разделы: Автомобили Астрономия Биология География Дом и сад Другие языки Другое Информатика История Культура Литература Логика Математика Медицина Металлургия Механика Образование Охрана труда Педагогика Политика Право Психология Религия Риторика Социология Спорт Строительство Технология Туризм Физика Философия Финансы Химия Черчение Экология Экономика Электроника

Тонкослойная хроматография липидов






Для проведения хроматографии используют полученный экстракт суммарных липидов. Носителем является силикагель. В работе используют готовые пластинки марки «Silufol».

Перед нанесением пробы край пластинки, предназначенный для погружения в растворитель (нижний край), подвергают окан­товке, т.е. слой силикагеля шириной 3-4 мм полностью соскабливают скальпелем в виде ровной полоски. Затем приступают к разметке линии старта. Она должна отстоять от нижнего края слоя силикагеля на 1-1,5 cм. Эта линия намечается несколькими уколами иглы в слой силикагеля. Точки нанесения проб по стартовой линии должны отстоять от боковых краев пластины на 2-2,5 см. Расстояние между точками 2 см. Таким образом, на пластинку размером 9х12 cм экстракт наносится в 3 точки.

В местах нанесения не должно быть повреждений целостности слоя от прикосновения микропипетки (капилляра). Нанесения производят микропипеткой на 0,1 мл либо стеклянным капилляром. Хлороформенный экстракт липидов наносят порциями по 0,02 мл при помощи микропипетки либо капилляра на выбранную точку на пластинке. Всего наносят 0,1-0,15 мл экстракта. После каждого нанесения дают испариться хлороформу. При нанесении экстрак­та диаметр пятен не должен превышать 3-5 мм.

Пластинку после нанесения экстракта липидов помещают в стеклянную, плотно закрытую камеру, обложенную внутри фильтровальной бумагой, в которую предварительно налита подвижная фаза. Количество этой фазы должно обеспечить слой жидкости на дне камеры высотой 0,8-1,0 см. В качестве подвижной фазы употребляют смесь - петролейный эфир: бутиловый эфир уксусной кислоты: уксусная кислота (70:30:1 по объему). Пластинку устанавливают в камере под углом 45-60°С. Время разгонки 45-60 мин (зависит от температуры помещения). Фронт растворителя за это время должен подняться на 9-10 см. При вынимании пластинки из камеры отмечают иглой положение фронта растворителя (для последующего вычисления величины Rf).

Пластинку сушат под тягой на воздухе, разрезают на 3 равные части. Каждую полоску обрабатывают следующими методами:

Окраска родамином Ж. Одну часть высушенной хроматограммы помещают на 3-4 мин в раствор 0,002%-ого родамина Ж. Избыток красителя смывают водой и хрматограмму просматривают в ультрафиолете.

Окраска парами йода. Вторую часть пластинки помещают на несколько минут в камеру, насыщенную парами йода. На хроматогpaмме появляются желтые или коричневые пятна липидов, содержащих ненасыщенные жирные кислоты.

Окраска нингидрином. Третью часть пластинки помещают в раствор 0,25 % нингидрина в ацетоне. При нагревании в сушильном шкафу (t= 800С) либо над электроплиткой появляются фиолетово-розовые пятна липидов, содержащих аминогруппы.

 

 







Дата добавления: 2015-04-16; просмотров: 945. Нарушение авторских прав; Мы поможем в написании вашей работы!



Расчетные и графические задания Равновесный объем - это объем, определяемый равенством спроса и предложения...

Кардиналистский и ординалистский подходы Кардиналистский (количественный подход) к анализу полезности основан на представлении о возможности измерения различных благ в условных единицах полезности...

Обзор компонентов Multisim Компоненты – это основа любой схемы, это все элементы, из которых она состоит. Multisim оперирует с двумя категориями...

Композиция из абстрактных геометрических фигур Данная композиция состоит из линий, штриховки, абстрактных геометрических форм...

Понятие массовых мероприятий, их виды Под массовыми мероприятиями следует понимать совокупность действий или явлений социальной жизни с участием большого количества граждан...

Тактика действий нарядов полиции по предупреждению и пресечению правонарушений при проведении массовых мероприятий К особенностям проведения массовых мероприятий и факторам, влияющим на охрану общественного порядка и обеспечение общественной безопасности, можно отнести значительное количество субъектов, принимающих участие в их подготовке и проведении...

Тактические действия нарядов полиции по предупреждению и пресечению групповых нарушений общественного порядка и массовых беспорядков В целях предупреждения разрастания групповых нарушений общественного порядка (далееГНОП) в массовые беспорядки подразделения (наряды) полиции осуществляют следующие мероприятия...

Машины и механизмы для нарезки овощей В зависимости от назначения овощерезательные машины подразделяются на две группы: машины для нарезки сырых и вареных овощей...

Классификация и основные элементы конструкций теплового оборудования Многообразие способов тепловой обработки продуктов предопределяет широкую номенклатуру тепловых аппаратов...

Именные части речи, их общие и отличительные признаки Именные части речи в русском языке — это имя существительное, имя прилагательное, имя числительное, местоимение...

Studopedia.info - Студопедия - 2014-2024 год . (0.009 сек.) русская версия | украинская версия