В две сухие пробирки пипеткой отмеряют по 0,25 мл исследуемого биологического материала, разведенного в несколько раз физиологическим раствором либо дистиллированной водой, добавляют по 4 капли концентрированной серной кислоты. При этом надо стараться, чтобы капли падали прямо на жидкость, а не на стенки пробирки. Пробирки ставят на песчаную баню для сжигания (минерализации). Параллельно ставят контрольную пробу, т.е. пробирку с таким же количеством концентрированной серной кислоты, как и в опытной пробирке. Затем берут кусочки ваты, смачивают их дистиллированной водой, отжимают и придают форму шарика, которым и прикрывают отверстия пробирок. Влажная вата улавливает пары серного ангидрида, раздражающие дыхательные пути. При наличии вытяжного шкафа сжигание производят под тягой. При сжигании азота пробирки должны только касаться верхнего слоя песка, их нельзя зарывать в песок, потому что при этом происходит перегрев в воздушном пространстве и органический азот разлагается не до серно-кислого аммония, а до свободного азота, который улетучивается и пропадает для определения. Кроме того, пробирки следует ставить в сильно наклонном положении, чтобы кипящая жидкость не выбрасывалась с брызгами через отверстие пробирки, а ударялась о стенки и стекала вниз. Сжигание ведется до полного обесцвечивания жидкости. Для этого требуется 30-40 мин с момента закипания. После сжигания пробирки охлаждают при комнатной температуре (нельзя охлаждать их под струей холодной воды во избежание несчастного случая), а затем маленькими порциями добавляют в пробирки дистиллированную воду до 1/4 объема. Содержание каждой пробирки количественно переносят через воронку в мерную колбу емкостью 25 мл. Пробирку и воронку ополаскивают 2-3 раза небольшим количеством дистиллированной воды. Общий объем воды при этом не должен превышать 12-15 мл. Далее содержимое каждой колбочки нейтрализуют 50 % раствором едкого натра до слабощелочной реакции, проверяя среду по лакмусовой бумажке. Щелочь по каплям прибавляют до тех пор, пока лакмусовая бумага не приобретет синеватый оттенок. Перещелачивание является причиной помутнения раствора, недощелачивание вызывает выпадение в осадок солей ртути, поэтому нейтрализовать надо очень аккуратно. Объем в колбочках доводят дистиллированной водой ориентировочно до 20 мл. Далее в колбочки добавляют по 1 мл 50 % раствора сегнетовой соли и 1 мл реактива Несслера, перемешивают, доливают водой до отметки и снова перемешивают.
Через 15 мин опытные пробы колориметрируют на фотоэлектроколориметре при длине волны 435 нм против контроля.
