Приборы и материалы. Дистиллированная вода

Электроплитка

Водяная баня

Раствор каталазы

Дистиллированная вода

Перекись водорода 2 %

Серная кислота 10 %

Перманганат калия 0,1 М

 

Описание работы

Готовят контрольную пробу. Для этого в пробирку наливают 3 мл рабочего раствора каталазы и ставят ее в кипящую водяную баню на 5 минут для инактивации фермента.

Далее в две колбы вместимостью 50 мл наливают по 7 мл дистиллированной воды и по 2 мл 2 % раствора перекиси водорода. В обе колбы вносят по 1 мл рабочего раствора каталазы: в опытную колбу - некипяченый раствор, а в контрольную - кипяченый раствор фермента. Затем обе колбочки оставляют при комнатной температуре на 30 мин. После инкубации в каждую колбу прибав­ляют по 5 мл 10 % раствора серной кислоты для прекращения действия фермента и создания кислой среды, необходимой для тит­рования нерасщепленной перекиси водорода. Титруют 0,1 М перманганатом калия до появления розовой окраски, держащейся 1 минуту.

Активность фермента выражают в стандартных единицах, при этом учитывают, что 1 мл 0,1 М КмnО4 соответствует 1,7 мг перекиси водорода.

Удельную активность рассчитывают по формуле:

 

,

где: а – количество KmnO₄ , пошедшее на титрование в контроле, мл;

в - то же самое в опыте, мл;

1,7 – коэффициент для пересчета KmnO₄ на перекись водорода, мг;

34 – молекулярная масса перекиси водорода;

t - время инкубации, мин;

Ve- объем рабочего раствора фермента, мл;

Vc - объем инкубационной среды, мл;

1000 – коэффициент для перевода в мкмоли;

s - концентрация белка в мл рабочего раствора фермента, мг / мл.