Лабораторная работа 15. Определение нарастания аминоазота в процессе автолиза

При автолизе под влиянием присутствующих в клетках протеолитических ферментов происходит расщепление клеточных белков на полипептиды и аминокислоты и в автолизате увеличивается количество свободных карбоксильных и аминных групп. Полипептиды и аминокислоты являются амфотерными веществами. В водном растворе они способны диссоциировать как кислоты и как основания, поэтому определить количество кислотных и основных групп методом титрования можно только в том случае, если одна из них будет блокирована.

Принцип метода формолового титрования основан на блокировании свободных аминогрупп формальдегидов и определению количества свободных карбоксильных групп титрованием щелочью. Реакции протекают по следующим уравнениям:

Определяя количество щелочи, пошедшее при формоловом тит­ровании на нейтрализацию свободных карбоксильных групп до начала автолиза и по окончании его, вычисляют, какое количество щелочи связалось с карбоксильными группами вновь образовавшихся полипептидов и аминокислот. Поскольку при разрыве пептидной связи освобождаются аминные и карбоксильные группы в эквивалентных количествах, то по количеству щелочи, пошедшей на нейтрализацию карбоксильных групп, можно определить количество свободных аминогрупп.

Следует иметь в виду, что метиленовые производные аминокислот и полипептидов, образующиеся при нейтрализации автолиза, являются солями очень слабых кислот и сильного основания, и в момент нейтрализации реакция среды автолиза становится щелочной (рН 9,1).

Для титрования следовало бы применять индикатор, меняющий свою окраску при рН 9,1. За неимением такого можно воспользоваться фенолфталеином (зона перехода от рН 8,3 до рН 10,0) и титровать исследуемую жидкость до промежуточного розово-красного окрашивания, соответствующего рН 9,1. При применении фенолфталеина в качестве индикатора для удобства титрования заготовляют сначала контрольную пробу с рН 9,1, жидкость в которой окрашена в розово-красный цвет, и эту контрольную пробу используют для сравнения окраски при титровании опытных проб.

1 Цель работы – определить концентрацию аминного азота в ходе процесса автолиза методом формолового титрования