Обратимые ингибиторы

Различают три типа обратимого ингибирования ферментов: конкурент­ное, неконкурентное и бесконкурентное.

Конкурентным называют ингибитор, обратимо взаимодействующий с актив­ным центром фермента. Как правило, конкурентные ингибиторы по структуре похожи на субстрат и могут вытесняться из фермент-ингибиторного комплек­са избытком субстрата. Взаимодействие с конкурентным ингибитором не при­водит к денатурации или инактивации фермента, поэтому при замене ингиби­тора на субстрат скорость ферментативной реакции не снижается (рис. 6.10).

При взаимодействии фермента с конкурентным ингибитором изменяется значение К_м соответствующей ферментативной реакции.

Сходство субстрата и конкурентного ингибитора достаточно для взаимо­действия и образования фермент-ингибиторного комплекса, но недостаточно для ферментативной реакции. В качестве примера можно привести действие малоновой кислоты на реакцию, которая катализируется сукцинатдегидроге-назой и связана с превращением янтарной кислоты в фумаровую.

Добавление малоновой кислоты к реак­ционной смеси снижает или полностью ос­танавливает ферментативную реакцию, так как она является конкурентным ингибито­ром сукцинатдегидрогеназы.

соон—сн₂—соон

малоновая кислота

Сходства малоновой кислоты с янтарной достаточно для образования комплекса с ферментом, однако распад этого комплекса не происходит. При увеличении концентра-. /I нтарной кислоты она вытесняет малоновую кислоту из комплекса, в ре-льтате активность сукцинатдегидрогеназы восстанавливается.

Многие лекарственные вещества ингибируют ферменты человека и жи-, вотных по конкурентному типу. Примером могут служить сульфамидные пре-араты, по структуре сходные с л-аминобензойной кислотой (ПАБК). Это со-1еаинение в микробных клетках является интермедиантом фолиевой кисло-[ты — важного компонента нуклеинового обмена. При введении сульфамидных |шрепаратов в организм происходит ингибирование ферментов метаболизма К, что приводит к снижению синтеза нуклеиновых кислот и гибели мик-|роорганизма.

В данном случае сульфаниламид является конкурентным ингибитором фермента синтеза фолиевой кислоты.

В структуру пептогликана клеточной стенки бактерий включен о-аланин, отсутствующий в организме животных и человека. Для синтеза клеточной •стенки бактерии при помощи фермента аланин-рацемазы превращают живот-[иый ь-аланин в О-форму. Аланин-рацемаза характерна для бактерий и не об-^шаружена у млекопитающих. Следовательно, она представляет хорошую ми-внь для ингибирования лекарственными препаратами. Замещение одного из ¹ протонов метильной группы на фтор дает фтораланин, с которым связывается ^«•анин-рацемаза, что приводит к ее ингибированию.

Таким образом, можно конструировать лекарственные вещества, ингиби-[рующие ферменты по конкурентному типу. Чтобы быть эффективным, инги-| битор должен иметь высокое сродство к ферменту. В противном случае необ­ходимо назначать большие дозы лекарственных препаратов, чтобы активно конкурировать с эндогенным субстратом за активный центр фермента.

Неконкурентные ингибиторы взаимодействуют с ферментами не в области [активного центра, а на каком-то от него удалении, причем никаким избытком | субстрата из комплекса не удаляются. При взаимодействии ингибитора с фер- • ментом происходит изменение его конформации с последующей частичной дезинтеграцией активного центра. При взаимодействии фермента с неконку­рентным ингибитором изменяется У_тах ферментативной реакции.

Бесконкурентное ингибирование имеет место, когда ингибитор взаимо­действует с ферментом только в составе фермент-субстратного комплекса, препятствуя его распаду. Примером необратимого действия ингибиторов на ферменты могут служить фосфорорганические вещества, применяемые в ка­честве инсектицидов.

Тип ингибирования можно определять графически, используя методы Лайнуивера—Бэрка или Эди—Хофсти (рис. 6.11).

Как видно из рис. 6.11, влияние конкурентного ингибитора на скорость реакции приводит к изменению К_и, максимальная скорость реакции при этом остается без изменения. Неконкурентное ингибирование связано со снижени­ем У_тах, без изменения константы Мехаэлиса.

Активность многих ферментов тормозится избытком субстрата, причем имеется несколько механизмов этого процесса.

• Если в образовании фермент-субстратного комплекса участвует не­сколько функциональных групп фермента, то возможно одновременное при­соединение к активному центру двух или более субстратов, что однозначно приведет к образованию неактивного комплекса.

• В случае избытка субстрата возможно его присоединение не только к ак­тивному центру, но и к другим химическим группировкам, функционально связанным с активным центром. Такого рода взаимодействие может помешать ферментативной реакции.

• Увеличение концентрации субстрата может повысить ионную силу реакци­онной среды и, как следствие, затормозить скорость ферментативной реакции.

Торможение продуктами реакции связано с тем, что они могут связывать­ся с ферментом или с каким-либо другим компонентом системы таким обра­зом, что скорость прямой реакции снижается.