КДЗ определения определения активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ), изоферментный состав, органспецифичность

ЛДГ (L-лактат, НАД-оксидоредуктаза, ЛДГ) – гликолитический (цитозольный цинкосод-ий) фермент, обратимо катализирующий окисление L-лактата (молочной кислоты) в пируват (ПВК). НАД (никотинадениндинуклеотид) – кофактор фермента. Фермент широко распространен в организме человека, по степени убывания активности фермента органы и ткани могут быть расположены в следующем порядке: почки, сердце, скелет мышцы, поджелуд железа, селезенка, печень, легкие, сыворотка крови. В цитоплазме клеток и плазме (сыворотке) выявлено пять изоэнзимов ЛДГ, это количество обусловлено наличием 2-х генетических локусов, которые кодируют синтез 2-х олигомеров: субъединицы М (muscule) и субъединицы Н (heart). Комплексуясь в тетрамеры, субъединицы образуют 5 изоформ, обозначаемых в соответствии с их подвижностью в электрическом поле так: ЛДГ1 (НННН), ЛДГ2(НННМ), ЛДГ3 (ННММ), ЛДГ4 (НМММ), ЛДГ5 (ММММ). В цитоплазме сперматозоидов присутствует ЛДГ-Х (4 идентичные Х-субъединицы, кот отличаются по АК составу Н и М, промежуточная подвижность по отношению к подв-и ЛДГ3 и ЛДГ4).

Субъединица М синтезируется в тканях с анаэробным метаболизмом(скелетные мышцы, печень), в то время как субъединица Н присутствует в тканях с аэробным метаболизмом (миокард, почки, мозг, эритроциты, тромбоциты). Установлено, что фракция ЛДГ1 нах в основном в сердце, ЛДГ5 – в печени. ЛДГ1 осущ-ет окисление лактата в пируват, ЛГД5 - пирувата в лактат. ЛДГ содерж не только в плазме, но и в значительном количестве в эр, поэтому сыворотка для анализа д/б без следов гемолиза.

КДЗ: Повышается активность ЛДГ у больных, страдающих анемией (гемолитической, пернициозной, мегалобластной, серповидно–клеточной), обширным карциноматозом, опухолями, лейкозами, лимфомой, вир и невир гепатитом, обтурационной желтухой, циррозом печени, зб почек, опорно- двиг аппарата, ИМ и легкого, а также при любом поражении клеток, приводящем к цитолизу и гибели.

При о гепатите активность ЛДГ увеличена в первые недели желтушного периода. Относительная активность изофер ЛДГ4 и ЛДГ5 повышена у всех больных инф гепатитом в первые 10 суток, степень повышения не зависит от тяжести зб, после наступления клин выздоровления у трети пациентов увеличение относительной активности ЛДГ4 и ЛДГ5 было единственным показателем, свид о незаконченном восстановительном процессе в печени после клинич выздоровления.

У больных ИМ активность фермента в сыворотке крови повышалась через 8-10 часов после начала приступа, достигая макс через 24-28 часов, оставалась увелич на протяжении первой недели зб, нормализация к 8-9 сут. Характерно, что общая активность сывороточной ЛДГ у больных ИМ сохранялась повышенной вдвое дольше, чем активность др ферментов. Установлена корреляционная связь м/у размером очага омертвления в миокарде и общ акт-стью ЛДГ. ИМ сопровождается ↑ ЛДГ1 и ЛДГ2. При высоком уровне ЛДГ следует опасаться неблагоприятного исхода зб, тк это обычно свидетельствует о наличии обширного, нередко трансмурального инфаркта. Увеличение общей активности ЛДГ или отношения ЛДГ1/ЛДГ2 наблюдается также при гемолизе любого происхождения, анемии, о некрозе почек, ЛДГ1 повышается при опухолевых поражениях зародышевых клеток (тератома, семиома яичек), увел ЛДГ5 – многие зб печени, повреждения скелетных мышц, злокач новообразования.

К увелич ЛДГ приводит прием алкоголя, кофеина, анаб стероидов, тестостерона, обезбол препаратов, ↓ ЛДГ – оксалаты и мочевина. Снижение активности ЛДГ: 2 группы причин- наличие ингибитора в сыворотке крови, генетические нарушения. В качестве ингибитора активности ЛДГ выступают Ig G, Ig A, Ig M.

Методы определения активности ЛДГ могут быть подразделены на 2 основные группы:

1. Кинетические, базирующиеся на оптическом тесте Варбурга (оптический эффект, связан с превращением НАД в НАДН и наоборот, уменьшение концентрации НАДН пропорционально активности ЛДГ): норма: 174-516 Е/Л

2. Колориметрические методы – определяется количество образовавшегося продукта или потребляемого субстрата после фиксированного инкубац периода. Наиболее известный способ, основанный на образовании пируват-2,4 –динитрофенилгидразона, дающего коричневое окрашивание в щелочной среде

3. Более ограничено применение редоксикаторных методов, базирующ на окислении лактата и опред образуемого НАДН с помощью тетразолий-формазоновой реакции или посредством реакции с 2,6-дихлорженолиндофенолом. – этот метод точен и технич прост, но требует большого колич-ва реактивов. Известен метод, базирующийся на воссановлении (с помощью НАД Н2 и переносчика Na – метилфеназонийметилсульфата) йоднитротетразолия фиолетового в красный формазан.

Для изучения изоферментного состава ЛДГ: фракционировании методом зонального электрофореза или хроматографии, Дифференцированном неселективном и селективном ингибировании изоэнзимов ЛДГ: пируватом (ЛДГ1 более чувствительна к его влиянию, чем ЛДГ5), лактатом, оксало\атом (более ингибурует ЛДГ1, чем ЛДГ5), мочевиной – инактивирует ЛДГ5. Различии в тепловой стабильности изоф (ЛДГ1 стабилен при температуре 65, др быстро инактивируются). Применении ат (к ЛДГ1 и ЛДГ5): иммунохимические тесты.