Определение активности кислой и щелочной фосфатазы. КДЗ

Фосфатазы или гидролазы – ферменты, отщепляющие остаток фосф кислоты от ее орган соединений. В зависимости от рН – кислая и щелочная фосфатазы.

ЩФ – фосфомоноэстераза, металлопротеин (в составе акт центра - цинк), гидролизует субстраты при оптимуме рН=10, сод-ся практически во всех тканях организма, прежде всего в костной, паренхиме и стенках желчных протоков печени, проксимальных отделах канальцев почек, в предстательной железе и молочной железе, клетках слизистой оболочке кишечника, плаценте. Особенно много ЩФ в растущих костях (содержатся в мембранах остеобластов), желчи, плаценте. В плазме крови детей она в 1,5-3 раза выше, чем у взрослых. Локал-ся на кл мембр, осущ-ет транспорт. Акт-стьсост. 0,5-1,3 ммоль/(ч*л), у детей в 1,5 р выше.

ЩФ гетерогенный фермент, представлена отдельными изоэнзимами, каждый в определенном органе: печеночная, почечная, костная, кишечная, холестатическая ШФ. Изофермент «Реган» обнаружен у 1/6 онкобольных и у 1/3 больных с повыш общей активности ЩФ. В норме у взрослых обнар ЩФ печеночного происхождения, у детей сыворотка содержит и костную ЩФ.

КДЗ: У больных с 2-мя видами патологии повыш ЩФ: костные зб (пролиферация остеобластов) и зб, сопровождающиеся холестазом. Повышается при рахите (до появления клиники и до снижения неорганич фосфора в крови) – выявление скрытых форм рахита. Повыш ЩФ у беременных – отражает функцию плаценты и состояние плода. Гиперфосфатезимии при зб костей, связ с повышением кол-ва остеобластов, при распаде костной ткани: гиперпаратиреозе (б-нь Реплингаузена), б-нь Педжета, карцинома костной ткани, метастазах в кости, оссифицирующем миозите, лимфогранулематозе с поражением костей. У больных с опухолями костей без новообразований костной ткани (хондромы) активность ЩФ не изменяется. Не повышается активность фермента в крови также при деструктивном характере повреждения костей. При зб печени (вир гепатит, саркоидоз, туб, лимфогранулематоз – умер повышение ЩФ. Резко увел ЩФ при желтой атрофии печени, абсцессах печени, поражениях печени аминозином, метилтестостероном. Повыш ЩФ при мех желтухе. При лейкемии умер повышение.

Гипофосфатаземии (снижение ЩФ) – замедленный рост у детей, авитаминоз, гипотиреоз, старческий остеопороз, накопление в костях радиоактивных веществ. Муж-0,9-2,29 мккат/л, жен – 0,74-2,1 мккат/л, дети-1,2-6,3 мккат/л.

Кислая фосфатаза (фосфомоноэстераза 2), изоферментами представлена 2,3,4. Оптимут действия при рН=4,6, содержится главным образом в предстательной железе (ее активность в 1000 раз выше, чем в костной ткани, печени и селезенке). ФМЭ 2 в отличии от др КФ ингибируется тартратом (на этом основано определение простатического изоэнзима фермента). КФ3 (оптимум 3,4-4,4) нах в печени и др паренхиматозных органах, КФ4 (рН 5,2-6,2) в тромбоцитах и эритроцитах. КФ при комнатной температуре быстро теряет свою активность, оксалаты, цитраты, ЭДТА –подавляют активность ЩФ. Повышение активности КФ, в большом количестве содержа­щейся в предстательной железе, при нормальном уровне ЩФ указывает на новообразования в этой железе. Введение тестерона приводит к увеличению числа положительных фосфатазных проб при карциноме простаты, повышению содержания «простати­ческой фракции» КФ, особенно, если опухоль вышла за пределы капсулы или дала метастазы. При метастазах карциномы пред­стательной железы в кости увеличивается также и активность ЩФ. Возрастание активности КФ наблюдается через 1—2 сут после оперативного вмешательства на предстательной железе (а также при ее биопсии). Активность ревматического процесса коррелирует с возрастанием уровня КФ в сыворотке крови. Наи­более высокая активность фермента наблюдается у больных с затяжным и непрерывно рецидивирующим процессами.

М-ды исследования акт-сти ЩФ и КФ разнятся только лишь рН применяемого буферного раствора. М-ды конечной точки (опр-ся отщепившийся неорг фосфат или органический остаток), м-ды различаются по используемому субстрату. Флюорометрический м-д – исп-ся флюорогенный субстрат 4-метилумбериферрил фосфата. Колориметр м-ды.