Техника посева и инкубации, оценка и учет результатов

Достоверная клиническая интерпретация результатов микробиологического обследования достигается при обязательном соблюдении следующего правила:

Микроскопическое и культуральное исследования должны производиться параллельно только из одной и той же пробы диагностического материала.

4.3.1. Процедура посева

Рабочее место микробиолога организуется таким образом, чтобы исключить операторские ошибки.

Перед процедурой посева необходимо подготовить пробирки с питательными средами, пронумеровать их, согласно нумерации анализов, и последовательно расположить в вертикальном штативе. Аналогичным образом подготовить и пронумеровать предметные стекла для приготовления мазков.

Перед началом забора посевного материала пипеткой убедиться в том, что номер пробирки с посевным материалом соответствует номерам пробирок с питательной средой и номеру предметного стекла для приготовления мазка.

Проверяют соответствие расположения пробирок с готовым осадком и предметных стекол в порядке их регистрационных номеров;

— набрать стерильной мерной или пастеровской пипеткой 1,0 —
1,2 мл полученного после обработки и нейтрализации осадка, оставив
приблизительно 0,2 мл для последующего приготовления мазка для
микроскопии;

— соблюдая условия стерильности, внести равные объемы
набранного материала (примерно по 0,5 - 0,6 мл) в 2 пробирки с
разными плотными питательными средами;

— пробирки с питательной средой при посеве должны
находиться в наклонном положении (под углом 40-45°);

— посевной материал нанести на верхнюю треть косяка
питательной среды;

— засеянные пробирки закрыть ватно-марлевыми и поместить в
наклонном положении в штатив таким образом, чтобы посевной
материал равномерно распределился по всей поверхности косяка
питательной среды; можно использовать дренированные (с продетым
льняным или хлопчатобумажным шнуром) силиконовые пробки
соответствующего диаметра;

— остаток осадка забрать той же пипеткой и нанести на
подготовленное и пронумерованное предметное стекло 1—2 капли
осадка для получения мазка;

— использованную пипетку опустить в емкость с
дезинфицирующим раствором;

— по завершении посева всех проб засеянные пробирки
переместить в горизонтальные штативы -"диваны" и поместить в
термостат при температуре 37°С; при этом поверхность косяка
питательной среды должна находиться в горизонтальной плоскости, а
наклон штатива должен исключить смачивание пробки материалом
засева. Подготовленные мазки оставляют сушиться на воздухе.

4.3.2. Инкубация

Инкубация микобактерий туберкулеза имеет свои особенности. Они заключаются в том, что микобактерий размножаются чрезвычайно медленно — время деления микробной клетки составляет 18—24 часа. Это требует длительного срока инкубации для получения видимого роста колоний. Длительный срок инкубации диктует необходимость соблюдения ряда правил для сохранения жизнеспособности клеток и ростовых свойств питательной среды. Кроме того, микобактерий туберкулеза требовательны к составу питательных сред, составу газовой среды и чувствительны к различным токсическим агентам, которые могут поступать в пробирку или вместе с воздухом или из некачественной среды, сопровождать процедуры получения осадка. Оптимальная температура инкубации -37°С. При снижении температуры скорость размножения микобактерий туберкулеза быстро снижается.

При первичном посеве микроскопически отрицательного материала средняя продолжительность роста микобактерий туберкулеза на плотных питательных средах может составить 20—46 дней. Рост отдельных штаммов появляется через 60 и даже 90 дней. Это обусловливает необходимость при отсутствии роста микобактерий для выдачи отрицательного результата выдерживать посевы в термостате до 12 недель.

В процессе инкубации посевов необходимо соблюдать следующее:

— по истечении первых 2-3 суток инкубации ватно-марлевые или
дренированные силиконовые пробки заменяют герметичными
резиновыми или силиконовыми;

— после этого засеянные пробирки переводят в вертикальное
положение;

— инкубацию проводят в течение 12 недель при обязательном
еженедельном просмотре;

— во время еженедельных просмотров регистрируют следующие
параметры для каждой питательной среды:

— "появление роста" — срок появления роста, начиная со дня
посева;

— "интенсивность роста" — суммарное число
колониеобразующих единиц (КОЕ) на всех пробирках, засеянных
данным материалом, если материал засевается на пробирки с
одинаковыми средами (этот показатель имеет большое
диагностическое и прогностическое значение, особенно если посевы
производятся в динамике наблюдения за больным в процессе
химиотерапии); Если инокулируются разные питательные среды,
результат отмечается для каждой из них.

— "загрязнение посева" неспецифической гноеродной
микрофлорой или грибами;

— "отсутствие роста";.

Все указанные параметры регистрируются в протоколе каждого анализа.